Легкие подписи: Как пользоваться — Онлайн генератор подписей. Создать подпись онлайн бесплатно.

Легкие подписи на паспорт. Как придумать подпись оригинальную и красивую? Советы по выбору личной подписи

1.Клички и прозвища, образованные от фамилий, сгодятся, когда придет время придумывать роспись. Правда, это для людей, которые обладают некоторым чувством юмора. На практике это выглядит так: человек обрывает написание фамилии в том месте, где можно поставить логическую точку. Например, у человека фамилия Каменев. Он может подписываться, заключая в красивую завитушку существительное «камень».

2.Не мудрствуя лукаво. Кому первый вариант не по вкусу. Можно использовать более простой. Просто оборвать фамилию в любом месте, где хочется и заключить «огрызок» в эллипс либо поставить прочерк.

3.Если некоторым кажется, что фамилии в росписи может быть сиротливо без инициалов, то можно включить и их. Здесь главное, чтобы инициалы соединялись с фамилией органично и красиво.

4.Если человек склонен к играм разума, и ему по каким-то причинам не хочется в росписи показывать свою фамилию, то отличительный знак может быть составлен из отчества и имени.

5.Можно и не идти общепризнанным путем, а подумать об индивидуальной подписи. Все ограничивается только воображением человека. Варианты росписи к фамилии в этом случае разнообразны. Но такой метод не очень-то легок по сравнению с остальными.

Здесь нужно представить, в какой узор могут лечь первые буквы имени, отчества и фамилии, чтобы образовать осмысленный рисунок либо красивое словосочетание или слово. Как придумать роспись такого рода?

Примеров может быть масса. Как версия – «Лева» может получиться из имени Леонид и Пантилеев. Правда, знаменитый писатель, который приходит на ум при этом примере, наверняка подписывался иначе, но это не относится к делу.

Как придумать роспись к фамилии: важно помнить

Да, и стоит упомянуть о том, чего лучше не делать.

1. Не нужно подпись обезличивать, то есть подписываться геометрическими фигурами или тайными знаками.
2. Инициалы, имя, отчество, фамилия в росписи все равно должны быть в том или ином виде.

Красивая подпись — важная составляющая идентификации каждого человека. По ней графолог может проанализировать тип и характер личности. Научиться изящно расписываться и придать уникальность подписи не просто. Для этого целесообразно воспользоваться представленными методами и образцами.

Как придумать красивую подпись — идеи и примеры

Все люди в определенный момент задумываются, как выбрать себе подпись, чтобы подтверждать в дальнейшем собственную личность. Получение паспорта — важный шаг в жизни каждого гражданина страны. В нем ставится личная роспись.

Паспорт — первый официально подписанный документ, поэтому к моменту его оформления важно определиться с этой частью идентификации человека.

Различают живую подпись и факсимиле. Факсимиле — это штамп, который повторяет росчерк должностного лица. Живая подпись — собственноручный автограф гражданских лиц.

Живая подпись

Факсимиле

У художников используется подрисуночная подпись — это текст под иллюстрацией, который поясняет изображение, росчерк самого творца.

При создании собственной подписи важно соблюдать некоторые правила:

• Она не должна быть неразборчивой, рекомендуется, чтобы отчетливо прослеживались элементы, связанные с личностью автора (инициалы).
• Нужно закрепить ее написание, подписать несколько бумаг, удостовериться, что последующие не отличаются от первоначальной.
• Нежелательно выбирать чрезмерно длинную или размашистую подпись. В дальнейшем это создает трудности при заполнении бланков документов, когда росчерк не помещается в отведенное для этого поле.
• Не рекомендуется отдавать предпочтение простым росписям, поскольку их легко подделать.

По фамилии

Люди преимущественно придумывают роспись, опираясь на фамилию. Для этого можно отделить от нее три буквы, а в конце добавить закорючки, завитки. Такие автографы особенно интересно выглядят, если начинаются с гласной.

Оригинально начать с первой буквы полного имени, а завершить частью фамилии.

На определенную букву

Подпись может состоять из одной заглавной буквы. А если добавить оригинальные детали к ней, получится уникальный результат.

На букву А:

Ж:
Сергей Жуков

М:
Михайлов

Инициалами

Подпись инициалами считается сокращенной. Вначале пишется первая буква имени, фамилии или отчества.

Для девушек

Девочки используют рукописную подпись, крутые завитушки, расписные буквы, классные и прикольные украшения. Женская роспись отличается элегантностью, обилием элементов.

Подпись обычно выбирают один раз, в редких случаях люди решаются поменять ее. В основном, это касается девушек, которые при замужестве меняют фамилию. Задумавшись об этом в девичестве, можно придумать росчерк, который после заключения брака не потребует замены. Например, создать его на основе имени.

Мужские

Мужские подписи преимущественно четкие, сдержанные, лаконичные. У сильного пола распространено ставить прямые линии без излишних загогулин и прочих дополнительных деталей. Но встречаются и исключения — витиеватые и причудливые узоры.

Целесообразно играть буквами, завитками, украшениями, тогда подпись будет выглядеть оригинально.

Для уникальности используют иностранный шрифт, например, арабские или китайские элементы.

Прикольные

Прикольной подпись выглядит, если на бумагу поставить тематические символы, характеризующие непосредственно человека или его жизнь, увлечения, работу.

Необычные

О хозяине такой подписи можно сказать, что это человек креативный, разносторонний, не любит стандартных вещей и стремится выделиться из толпы.

Короткие

Считается, что человек, который использует короткую подпись, предприимчив и решителен. Он быстро схватывает суть происходящего и не отвлекается на продумывание лишних элементов, которые при написании отнимают драгоценное время.

Простые

Легкие подписи оставляют люди, которые живут рационально и правильно. Росчерк для них не несет важной смысловой нагрузки. Однако такие подписи легко не только писать, но и подделывать.

Сложные

Нагруженные, сложные подписи говорят о незаурядности человека. Однако при выборе таковой важно учесть, что повторять ее придется часто, а сокращать или изменять росчерк крайне не рекомендуется.

Каллиграфические

Каллиграфия — искусство красивого письма. Правильная подпись или надпись без труда распознается людьми, выглядит аккуратно и привлекательно.

В виде животных

В конце росчерка используются маленькие картинки с интересными изображениями — птицы, лисы, собаки, кошки и другого зверя, нарисованные одной линией часто без отрыва руки. Такой дизайн свидетельствует о творческом мышлении людей.

Смешные

Когда в подростковом возрасте предоставляется выбор, как расписываться в паспорте, многие не придают этому вопросу серьезного значения. Или, наоборот, чрезмерно проявляют эпатажность и индивидуальность, выдумывая креативные и чудаковатые закорючки.

Однако подпись — это своеобразная характеристика личности, поэтому важно заранее обдумать различные варианты, чтобы росчерк впоследствии не казался странным, неуместным или слишком простым.

Образцы подписей великих и знаменитых людей

Автограф известной личности — его визитка. Звездами подписаны их диски, фотографии, книги. Они раздают автографы поклонникам, некоторые из которых коллекционируют росчерки разных знаменитостей.

Образцы подписей известных людей:

• Джон Хэнкок — использует шрифт старинной латиницы.

• Президент Российской Федерации Владимир Владимирович Путин применяет плавный переход элементов.

• Автограф Курта Воннегута. Вокруг подписи присутствует собственный профиль Курта, а внутри — его фамилия.

• Американский комик и актер Джей Лено с фантазией подошел к выбору автографа. Он использует карикатуру с подписью к фамилии.

• Российский политик Жириновский Владимир Вольфович, подписывается так

• На фото представлена подпись Пушкина. Она у него характерная, размашистая. В основе первая буква имени и фамилия.

• Владимир Ильич Ленин использовал две фамилии — Ульянов и Ленин.

• Медведев Дмитрий Анатольевич применяет аккуратное соединение заглавной буквы имени и отчества.

Присутствует понятие «министерской подписи» — она размашистая, аккуратная, но сложная.

Генераторы онлайн

Если человек сомневается в придуманных самостоятельно вариантах подписи и не может принять решение, целесообразно воспользоваться онлайн программами — сетевыми генераторами подписей, где хранится уже готовая подборка подписей.

Сделать это легко, процедура одинакова во всех сервисах и отличается только объемом вводимых реквизитов. Чтобы получить список индивидуальных вариантов подписей, перейти на сайт генератора и ввести требуемые данные: фамилию, имя, отчество.

Далее ресурс помогает создать лучшие варианты для заказчика. После выбора подходящего вида, ресурс предлагает сохранить подпись на компьютер. Далее доступно расписываться созданным реквизитом в электронных документах. Такие редакторы помогают делать подписи с учетом различных пожеланий.

В ТОП-5 сервисов-конструкторов, способных сгенерировать изящную подпись, входят:

• podpis-online.ru;
• ultragenerator.com;
• megagenerator.ru;
• coolonlinetools.net;
• mylivesignature.com.

О чем говорит роспись — анализ личности

По подписи составляют характеристику типа личности человека.

Какие бывают разновидности анализа по подписи, методики, принципы, изучают графологи. Их знания применяются у криминалистов, в судебной практике, психологии, психиатрии и так далее.

Показатели оценки подписи

Размер:

• компактная — характеризует всестороннее мышление личности;
• размашистая — конкретное мышление человека.

Длина:

• короткая — неприятие однообразной работы;
• длинная — усидчивость, занудство.

Нажим:

• сильный — характеризует уверенность;
• слабый — скрытность;
• чрезмерный — агрессивность человека;

Разборчивость:

• чем понятнее подпись, тем человек более открыт для окружающих.

Сложность:

• сложная — человек привык усложнять ситуации;
• простая — личность живет, не замечая проблем вокруг себя;
• оригинальная — показывает творческий потенциал;

Почерк человека много говорит о нем: характере, способностях, стремлениях. Человек выступает в роли художника, при этом одним близки точные и четкие линии, а другие отдают предпочтение сложным изгибам и завиткам.

Выбирать подпись важно не спеша, изучив шаблоны всевозможных вариантов. Далее попробовать ручкой на черновике повторить понравившийся вариант. Родители помогают детям подобрать росчерк, их образец зачастую становится примером для ребенка. В мире множество похожих росписей, но при этом каждая из них уникальна.

Факсимиле помогает удостоверить личность человека и присутствует на значимых документах: паспорте, нотариальных бумагах, договорах, актах купли-продажи недвижимости и т.д. Желательно, чтобы подпись человека не менялась в течение жизни. Хотя, женщина меняет роспись при каждом замужестве в соответствии с новой фамилией.

Тем не менее, каждый хочет сделать свою роспись самой красивой. Как этого добиться?

Как придумать себе оригинальную и красивую роспись?

Чтобы дело увенчалось успехом, следует запастись бумагой, шариковой ручкой и максимумом терпения. Нежелательно использовать ручки с гелевыми стержнями, так как они визуально улучшают почерк.

Красивые росписи, отработанные с помощью гелевых стержней могут смотреться совершенно непрезентабельно, если писать карандашом или простыми чернилами:

• Легче всего придумать самую красивую роспись в мире, опираясь на свою фамилию. Чаще всего для подписи оставляют первые 3-4 буквы фамилии. Наиболее интересные варианты получаются, если факсимиле начинается с согласной. Можно аккуратно прописать первые буковки и прибавить в конце элегантный росчерк. Кстати, психологи утверждают, что успешность человека во многом зависит от росчерка. Если закорючка опускается вниз, человек заранее обрекает себя на неудачу. Если в заключительной части подписи росчерк стремится вверх, позитивное начало обеспечено;
• Красивые росписи на паспорт получаются, если перед буквами фамилии поставить первую букву имени. Особенно выразительно смотрятся росчерки, в которых первой буквой является «С
  ». Она может изящно обрамлять остальную часть автографа. Можно использовать сразу 2 заглавные буквы – имени и фамилии;
• Нередко человек не желает афишировать фамилию. Банальная причина такого поступка – ее неблагозвучие. Поэтому в качестве факсимиле используют первые буквы имени или фамилии и продолжают роспись набором петель или завитков. Порой, у человека может присутствовать 2 росписи. Одна, с полным прописанием фамилии для такого документа, как паспорт, и укороченный вариант для прочих нужд, например, чтобы показать учителю, что родитель ознакомлен с оценками, выставленными в дневнике ребенка;
• Самая оригинальная подпись получается у людей, знакомых с основами каллиграфии. Изящное сплетение завитушек при написании первых букв имени и фамилии порой представляют невероятно изысканную картину. Некоторые обладатели подобной подписи специально делают трафареты, не желая портить красоту факсимиле торопливым исполнением. Заказав красивый трафарет росписи, можно не беспокоиться, что кто-то усомниться в подлинности автографа;
• При создании каллиграфической подписи следует учитывать небольшой нюанс. Для женщин позволительно использовать завитушки, однако мужской вариант должен отличаться более твердыми линиями.

Конечно, как сделать роспись красивой во многом зависит от почерка. Если человек не привык аккуратно выписывать буквы, пишет торопливо и неряшливо, любое сочетание элементов будет непрезентабельным. Поэтому необходимо приложить усилия, чтобы подписывать документы, не роняя своего «лица
».

О чем может рассказать роспись с красивыми завитушками?

Оказывается, обычная роспись может многое рассказать о своем хозяине. Уже упоминалось, что конечная завитушка, направленная вверх является признаком оптимизма, а вниз – показывает, что человек склонен к депрессивным настроениям и слишком неуверен в себе. Зато, прямая линия говорит о человеке со сбалансированным характером, склонным обдумывать свои поступки и придерживаться в решениях «золотой середины
».

Длинная роспись присуща людям с педантичным характером, привыкшим доводить все свои дела до конца. Они склонны к упрямству и редко полагаются на чужое мнение. Если росчерк достаточно короткий, его хозяин считается поверхностным, торопливым человеком, не терпящим медлительности, часто непостоянным и невнимательным.

Роспись с большим количеством завитушек и петелек чаще всего является женской. Мужчины предпочитают стремительные росчерки с обилием прямых линий.

Сделать роспись красивой недостаточно, нужно учесть, что часто для ее аккуратного написания не будет подходящих условий. Например, при получении пенсии в отделении банка в зимнее время человеку в теплой шубе достаточно сложно выписывать все буковки в надлежащем порядке.

Поэтому не стоит загромождать факсимиле обилием изящных элементов. В то же время слишком простая подпись может сыграть на руку мошенникам, так как подделать ее достаточно легко.

Практически каждый из нас рано или поздно стоит перед выбором – . А у женского пола такая задача бывает порой не раз. Тем более, что никто не застрахован от второго и даже третьего замужества, а значит, нужно придумывать себе роспись в соответствии со своей новой фамилией.

А некоторые, наоборот, вдруг . А все дело в «средненькой» росписи!

Конечно, все мы любим быть самыми-самыми. И подпись свою хочется сделать оригинальной, запоминающейся, красивой. Как стали знаменитыми росписи А.Пушкина, И.Канта, Ч.Диккенса
и других.

Но для того, чтобы изобразить на листе бумаги (а потом и на важнейших документах типа паспорта) красивую закорючку, следует хорошенько потрудиться. А мы расскажем, какие шаги предпринять, чтобы выдумать себе запоминающийся автограф.

Нам понадобится несколько листов бумаги, обыкновенная шариковая ручка и достаточный запас терпения.

1 способ

Давайте пойдем по пути наименьшего сопротивления – будем «плясать» от Фамилии. Большинство людей, согласно статистике, придумывают свою подпись, исходя именно из этого фактора. А потом пожинают плоды успеха, и даже придумывать не приходится!

Напишите свою Фамилию на листе бумаги, а потом отделите первые три буквы от нее. Возможно, это ваша будущая роспись! Особенно хорошо смотрятся такие автографы, производные от Фамилий, начинающихся на согласную букву. Хотя это не главный фактор.

Поиграйте с тремя первыми буквами вашей Фамилии, поставив в конце элегантную закорючку. Нравится? Если нет, попробуем следующий метод.

2 способ

Добавьте к вышеперечисленным трем буквам первую букву своего Имени. То есть – в вашей росписи будет две заглавных и остальные строчные буквы.

3 способ

Если Фамилию «светить» не хочется – можно поставить рядом первую букву Имени и Отчества. После этих двух букв могут идти красивые завитушки, а может продолжаться слово (имеется в виду Отчество).

4 способ

Вы уже догадались – расписываем все ФИО полностью. Можно поиграть с буквами, переставить их местами. Первые три буквы Фамилии можно присоединить к буквам Имени и Отчества.

5 способ

Если все вам кажется слишком просто и прозаично, тогда усложняем здание. Посмотрите внимательно на все тоже ФИО – причем на все буквы в отдельности. Попробуйте себя представить старинным каллиграфом (да, да – была в старину такая должность) и придумать завитушки в этих трех буквах. Однако, слишком много вензелей в мужской росписи смотрится некрасиво. Мужчину отличает твердость и прямолинейность росчерка, а вот женщине дозволено поиграть в «бантики и рюшечки».

Но самое интересное впереди: необходимо различными путями соединять эти буквы, чтобы одна, начинаясь, плавно переходила в другую.

Самый крутой вариант – когда буква располагается в букве, но обычно так везет счастливчикам с ФИО на буквы О, Е и С.

6 способ

Некоторые пытались сделать роспись, не применяя для этого собственное имя. Но постепенно люди разочаровывались в однажды выбранном варианте. Хотели быть оригинальными – а стали безликими. Бездушная «синусоида», «электрокардиограмма», «сыр-бор» — что говорит о человека такая подпись? Ровным счетом – ничего.

А вот в конце автографа можете постараться – сделать мощную (если таков ваш характер) или скромную завитушку из неорганизованных линий.

18 способов сделать рекламу в Facebook и Instagram эффективнее — ppc.world

Недавно Facebook выпустил видео с рекомендациями для подготовки рекламных креативов. Это простые советы, которые может выполнить практически любой рекламодатель, но польза от них значительная. Представители Facebook отмечают, что эти советы составлены по наблюдениям их креативной команды.

Мы перевели эти советы и добавили еще несколько рекомендаций из предыдущей подборки Facebook. Они охватывают креативы для видеорекламы, Stories, изображений и текстов.

Рекомендации для видео

Видеореклама в последние несколько лет становится популярнее, и если вы еще не тестировали ее — самое время это сделать. Вот несколько советов, на которые можно опираться при создании рекламного ролика.

Добавляйте подписи и субтитры

Представители Facebook утверждают, что добавление подписей и субтитров к видеороликам повышает длительность их просмотра в среднем на 12%. В соцсетях Facebook и Instagram по умолчанию видео воспроизводится без звука, поэтому желательно сделать так, чтобы оно было понятно даже в том случае, если пользователь не станет включать звук. Добавить субтитры можно в Ads Manager в Facebook на уровне объявления, но эта опция работает только для английского языка.

Если вы рекламируетесь на русскоязычную аудиторию, добавьте субтитры или подписи на монтаже.

Видеоролик с подписями

По ссылке — видеоролик от автомобильного бренда Ford. Здесь компания пошагово показывает и рассказывает, как покупатель может кастомизировать свою модель машины.

Banner

Рассказывайте о своем бренде сразу

Показав корпоративные элементы (цвета, символику, логотип, название) в первые три секунды видео, вы повышаете вероятность конверсии. Пользователь должен сразу увидеть, кто вы. Это также способствует лучшей узнаваемости бренда, ведь не все пользователи досматривают рекламные ролики до конца.

В этом объявлении компания, печатающая тексты на футболках, показала логотип в течение первых секунд.

Не откладывайте на конец ролика информацию об УТП

Этот совет дополняет предыдущий. Если в начале ролика не рассказать, что вы предлагаете пользователю, он, вероятно, так и не узнает о вашем УТП. В Facebook сообщают, что рекламодатели, которые рассказывали об УТП в первых пяти секундах ролика получали больше отклика от рекламы.

Создавайте короткие ролики

Если ролик будет слишком длинным, у пользователя вряд ли хватит терпения досмотреть его до конца. Рекомендуемая продолжительность рекламного ролика — не более 10-15 секунд. Этого достаточно, чтобы рассказать о компании и предложении.

Вот интересное объявление от авиакомпании Air Asia. Рекламодатель запустил несколько коротких роликов длиной до 10 секунд, которые показывают привлекательные стороны отпуска в Камбодже. Каждое видео рассказывает о чем-то одном: о кухне, о развлечениях, о необычных физических активностях.

Читайте по теме

Рекомендации для Stories

Stories — популярный и увлекательный формат как для пользователей, так и для рекламодателей. Так, данным за январь 2020 года 4 млн активных рекламодателей ежемесячно используют Stories для продвижения. Вот несколько советов по работе с ними.

Добавляйте текстовые выноски

С помощью текстовых выносок на креативе в Stories вы можете подчеркнуть разные качества продвигаемого продукта, указать выводы, сфокусировать внимание пользователя на чем-то важном или добавить дополнительную информацию о предложении. Можно протестировать разные варианты текстовых выносок и выбрать те, которые сработали лучше всего.

Используйте в рекламе для Stories несколько коротких сцен

Поэкспериментируйте с короткими быстро сменяющими друг друга сценами. Пользователи сейчас привыкли быстро поглощать информацию, и короткие емкие сюжеты могут восприниматься гораздо лучше, чем медленная подача информации.

Вот объявление IKEA для Stories: динамичный креатив с быстрой сменой кадров за 15 секунд показывает несколько городов для путешествий.

Еще один пример от Red Bull с помощью быстрой смены кадров демонстрирует фотографии молодых людей, путешествующих по Европе в рамках челленджа от бренда.

Учитывайте специфику Stories

В Stories лучше всего использовать вертикальный полноэкранный формат, он создан специально для этого плейсмента и обеспечивает пользователю эффект погружения, он не отвлекается на дополнительные элементы, как в ленте. Конечно, можно попробовать и другие форматы, но внимательно следите, чтобы важная информация не обрезалась.

Отличительная черта контента в Stories — непосредственность и живость. Поэтому попробуйте в качестве креативов живые фотографии или видео, снятые на смартфон, в том числе те, которые создали ваши клиенты. Можно протестировать несколько вариантов: профессионально снятые видео или фото и более простые. Если вы хотите сделать максимально аутентичный контент, похожий на органические посты обычных пользователей, добавьте стикеры. Но не переусердствуйте: они не должны отвлекать пользователя от рекламного сообщения и выбиваться из общего оформления креатива.

В рекламе для Stories Red Bull использовал зацикленное видео — Boomerang, а также наложил текст, написанный не корпоративным шрифтом, а шрифтом из Instagram, чтобы реклама выглядела максимально аутентично.

Не забывайте о цели рекламной кампании

Креатив должен соответствовать цели, которой вы хотите достичь с помощью рекламы. Например, если хотите повысить узнаваемость бренда и сформировать лояльность, сфокусируйтесь на людях, расскажите им интересную историю. Если нужны продажи, уделите больше внимания товарам. Только не указывайте цену в таких объявлениях слишком часто. Представители Facebook считают, что объявления без цен в Stories эффективнее.

Добавьте звук

В Facebook заметили, что истории с голосовым сопровождением или музыкой эффективнее, чем без звука. Аудиосопровождение позволит дополнить рекламное сообщение и усилит его эффект.

Читайте по теме

Рекомендации для изображений

Статичные изображения — самый простой, традиционный и часто используемый формат. Вот советы по работе с ним.

Используйте правильное соотношение сторон

Рекомендуемое соотношение сторон для ленты — 1:1 или 4:5, а для Stories — 9:16. Желательно придерживаться этого соотношения, чтобы креативы отображались корректно, а важные элементы не обрезались.

Призывайте пользователей к действию

Обязательно добавьте понятный CTA, чтобы показать пользователю, какое действие от него требуется. Если вы делаете рекламу формата Кольцевая галерея, призыв к действию можно добавить на последний экран.

Добавьте движения

Реклама с элементами движения привлекает внимание. Например, можно к статичному изображению добавить анимированный текст или использовать формат Boomerang или GIF.

В этом объявлении статичные изображения сменяют друг друга, а текст анимированный

В этом объявлении статичные изображения сменяют друг друга, а текст анимированный

Вот еще объявление от America’s Test Kitchen, здесь статичные изображения быстро сменяются анимированным текстом.

Миксуйте видео и статичные изображения

В Facebook утверждают, что кампании, в которых использовались и статичные изображения, и видео, в 86% случаев получали лучшие результаты по performance-показателям. Попробуйте с помощью разных форматов — изображений и видео — рассказать историю, чтобы привлечь внимание пользователей, и продемонстрировать продукт, чтобы стимулировать рост продаж.

Следите, чтобы текст не занимал много места

Facebook не любит креативы, на которых много текста. Представители соцсети рекомендуют всю информацию отражать в текстовом блоке, а для креатива оставить только визуальную составляющую. Но если вы все же добавляете текст, он должен занимать не более 20% изображения. Проверить это можно с помощью инструмента от Facebook: загрузите креатив, и Facebook выдаст результат.

Пример, когда текст органично вписался в креатив

Протестируйте кольцевую галерею

Преимущества кольцевой галереи перед статичным изображением заключаются в ее интерактивности и вместимости: с ее помощью можно рассказать и показать больше. Покажите историю, несколько товаров или способ использования продукта.

Вот пример необычной кольцевой галереи. Производитель обуви превратил свои фото в анимированные файлы GIF и сделал из них кольцевую галерею. Удалось продемонстрировать сразу несколько товаров и привлечь внимание пользователей с помощью движения.

Читайте по теме

Рекомендации для текста

И напоследок советы по написанию текста в объявлении.

Задавайте вопросы

По мнению Facebook, вопросы в тексте могут положительно повлиять на отклик и показатели конверсии. Они стимулируют людей взаимодействовать с брендом, реагировать, делиться своим мнением, повышают вовлеченность. Протестируйте разные варианты вопросов и понаблюдайте за поведением пользователей.

Пишите кратко

Люди очень быстро просматривают посты в соцсетях и не станут долго задерживаться, чтобы прочитать текст объявления. Согласно исследованию от Mobile Marketing Association, двум из трех человек достаточно 2–3 секунд, чтобы увидеть и распознать рекламу на десктопе, на мобильном еще меньше — 0,4 секунды. Старайтесь писать максимально емко и понятно и уместить информацию в 2–3 строки.

Расскажите о своем предложении в первой строке

Соцсеть может обрезать текст, и чтобы прочитать его целиком, пользователю придется его развернуть, а далеко не все захотят это сделать. Поместите УТП в начало, чтобы пользователь увидел его при первом взгляде на рекламу.

Информация о продукте указана в первой строке

Запускайте собственные рекламные кампании в Facebook и Instagram и применяйте советы на практике. Успехов!

Карандаш для подписи растений

Выберите категорию:

Все
Оцинкованные грядки

Оцинкованные грядки Дельта Парк

» Оцинкованные грядки высотой 14 см

» Оцинкованные грядки высотой 19 см Стандартные

» Оцинкованные грядки высотой 19 см Усиленные

» Оцинкованные грядки высотой 26 см

» Оцинкованные грядки высотой 36 см

» Оцинкованные высокие грядки 72 см

» Многоуровневые оцинкованные грядки

» Грядки с цветным порошковым покрытием

»» Стандартная грядка 14см с порошковым покрытием

»» Стандартная грядка 19см с порошковым покрытием

»» Усиленная грядка 19 см с порошковым покрытием

»» Усиленная грядка 36см с порошковым покрытием

»» Усиленная грядка 26см с порошковым покрытием

» Грядки для теплиц

»» Комплект Стандартных грядок для теплиц, 14 см

»» Комплект Стандартных грядок для теплиц, 19 см

»» Комплект Усиленных грядок для теплиц, 19 см

»» Комплект Усиленных грядок для теплиц, 36 см

» Оцинкованные компостеры

» Парники и теплицы Дельта Парк

» Оцинкованные бортики для грядок и клумб

»» Оцинкованный бортики Легкие для грядок и клумб высотой 14 см

»» Оцинкованные бортики Легкие для грядок и клумб высотой 19 см

»» Оцинкованный бортики Усиленные для грядок и клумб высотой 19 см

»» Оцинкованные бортики Усиленные для грядок и клумб высотой 36 см

»» Оцинкованные бортики Усиленные для грядок и клумб высотой 72 см

»» Аксессуары для оцинкованных бортиков

» Оцинкованные клумбы Дельта Парк

»» Клумба Легкая высота 14 см

»» Клумба Легкая высота 19 см

»» Клумба Усиленная высота 19 см

»» Клумба Усиленная высота 36 см

»» Цветная Легкая клумба 14 см

»» Цветная Легкая клумба 19 см

»» Цветная Усиленная клумба 19 см

»» Цветная Усиленная клумба 36 см

» Клумбы приствольные

»» Клумба приствольная 14 см

»» Клумба приствольная 19 см

»» Клумба приствольная 36 см

»» Клумба приствольная цветная 14 см

»» Клумба приствольная цветная 19 см

»» Клумба приствольная цветная 36 см

» Система хранения

Грядки ДПК Holzhof

» Грядка ДПК высота 15 см

» Грядки ДПК высотой 22,5 см

» Грядка ДПК высота 30 см

» Грядка ДПК высота 45 см

» Доски ДПК и комплектующие

» Цветники и клумбы из ДПК.

Грядки ДПК Nautic Prime

» Грядки ДПК Nautic Prime 15 см

» Грядки ДПК Nautic Prime 22,5 см

» Грядки ДПК Nautic Prime 30 см

Металлические грядки

» Металлические грядки высота 15 см

» Металлические грядки высота 20 см

» Металлические грядки высота 28 см

Оцинкованные грядки ВОЛЯ

» Оцинкованные грядки Ярус 17 см

» Оцинкованные грядки Ярус 34 см

» Оцинкованные грядки Ярус 51 см

Деревянные грядки

» Соединительные углы оцинкованные для грядок

Выращивание рассады

Компостеры

Сети садовые, защитные, шпалерные

» Сети от кротов

» Сети от птиц

» Садовые решетки

» Сети садовые

» Сети шпалерные

Семена

» Семена овощей, зелени, пряных трав

» Семена декоративных цветов

Фитосветильники

Грунты, удобрения и средства защита

» Орехнин

» Земля, Грунт, Биогумус

» Удобрения

» Химикаты от грызунов и насекомых

» Химикаты садовые

» Защита от кротов

» Защита от мышей и крыс

» Средства для септиков и выгребных ям

» Ускорители компостирования

» Щепа, кора

» Торф

Опоры для растений

» Опорпы для растений Знатный сад

» Кустодержатели Знатный сад

» Опоры для цветов Знатный сад

» Шпалеры для огурцов из стеклопластика и металла

» Шпалеры для вьющихся растений Знатный сад

» Столбики заборные для сетки

» Подставки под клубнику.

Садовый инвентарь

» Лопаты

»» Лопаты заводские

»» Лопаты эконом

» Аккумуляторы тепла

» Грабли

» Грабли веерные

» Плоскорезы

» Вилы

» Тяпки

» Ручные культиваторы

» Ручной инвентарь

» Секаторы

» Сучкорезы

» Кусторезы

» Ножовки садовые

» Прививочный инструмент

» Ножницы для травы

» Ручные косы, серпы

» Перчатки, рукавицы

» Буры для земли

» Садовые коврики

» Топоры Колуны

» Тачки садовые и строительные

» Тележки садовые пластик

» Колеса и камеры

» Плодосъемники

» Уборочный инвентарь

» Контейнеры садовые

» Сеялки распределители

» Стульчики садовые

» Посадочный интсрумент

» Водозгоны

» Корнеудалители

» Маски защитные

Парники Дуги Арки

» Парник Подснежник БашАгроПласт

» Парники

» Дуги парниковые

» Кустодержатели Подставки

» Опоры для растений

» Шпалеры

» Арки Пирамиды

» Садовые ограждения

» Аксессуары садовые

» Подставки для клубники

Укрывные материалы

» Мульчаграм

» Мешковина

» Агроткань, геотекстиль

» Спанбонд- нетканый материал

» Черный укрывной материал

» Агроткань застилочная (рулоны 100м)

» Приствольные круги

» Чехлы для растений

» Искуственый газон

» Тенты универсальные

Отдых, пикник, хобби

» Аксессуары для бани

» Уголь, дрова, щепа

» Для Мангала

» Мангалы

» Коптильни

Всё для полива сада

» Шланги

»» Шланги

»» Шланги растягивающиеся

» Капельный полив

» Бочки

» Опрыскиватели

» Распылители ручные

» Стационарные распылители

» Таймеры полива

» Конекторы Фитинги для шланга

»» RACO ORIGINAL

» Хомуты нержавейка

» Лейки садовые

Дачные души, ёмкости, умывальники, канистры

» Умывальники, Рукомойники

» Канистры для бензина

» Канистры для воды

Товары для дачи и дома

» Ведра и Емкости

» Сушилки для белья

» Швабры Веники

» Ерш трубочиста

» Мешки Пакеты

» Органайзеры Ящики

Садовый декор

» Поленница для дров

» Формы для дорожек

» Скворечники и кормушки для птиц

Все для газона

» Семена травы.

» Удобрения для газона

» Садовые катки

» Аэраторы

» Разбрасыватель сеялка

Всё для ремонта

» Емкости Ведра

ТОП 2020

Распродажа оцинкованных грядок

Уцененные товары

Шпагат

Производитель:

ВсеAeroheatAlexDiggermaerALKOAlveAugustBarnasCocolandCoverITDeliciaDenzelDetiaDrRobikElfeEnergyFertika Фертика (Кемира)FinlandFISKARSFLORIFusionGarden DecorGarden Dreams Гарден ДримзGardenaGardenDreamsGefestGIMIGreen AppleGreenBoomGrindaGROSSgryadka99HolzhofHuterKamToolsKeterKoreaMagic HoseMarolexMatrixNautic PrimeNekura (Некура)OOO Энви РусOXISSPalisadPalisad CampingPalisad LUXPARKPaveraRacoRobin GreenRockMeltShelterlogicSIATSIBINSpartaStayerStelsSternSturmSurrealTerraSolThermoventTimberkTM ElfeTruperUnitraumАвгустАгрокомАгросуфАгроуспехАлюметАртиАрти (Россия)АэлитаБайкалБайкал ЭМ 1БАРСБашАгроПластБеларусьБелЦентроМашБиопит (Biopit)БиоСептБИУДБочка и четыре ведраБуйские удобренияВестаВолнушаВоляГавришГрин БэлтДекоративная коллекцияДельта ПаркДжилексДизайнер цветниковДКДмитровДоктор РобикЕвро ГрядкиЖУКЗАО «БиохимПласт»Зеленая Аптека СадоводаЗри в кореньЗубрИмпортИнта-Вир®Комплект АгроКРОНЛама ТорфЛаматорфМечтаМир ЧистотыМогилевМПТ-ПластикНекураНКОАО «Элтерм»ОАО»НЗГА»ОгородникОктябрина АпрелевнаООО «Джета»ООО «Метлес-1″ООО «ЭлБЭТ»ООО Энви РусОртонПоискПолимерсадПольшаПроизводительПротэктРесантаРосинкаРоссияРуПластСадкоСадовая АптекаСадовникСветозарСердоликСибирские грядкиСИБРТЕХСМСолярогазСТРОЙМАШТехнотемпТехПластТитанисТМ ElfeУральский Завод Бытовых ИзделийУрожайФаворитФаскоЦентроИнструментЧетыре сезонаЧехияЭВНКАЭкокиллерЭкспертЭлвинЭРА

Факсимиле- Полиграфия в центре Москвы (Футболки, таблички, наклейки, плакетки, печати)

Факсимиле заказать, когда нужен помощник в работе с документами.

Каждый руководитель, офисный работник и любой человек, которому ежедневно приходится подписывать не один десяток документов, осознает важность и необходимость такой процедуры. Тем не менее, из-за загруженного графика и большого количества задач времени на подписание довольно важных бумаг не хватает, поэтому документы копятся в отложенной стопке и «ждут своего часа». Случаются и другие ситуации, например, срочно необходима подпись генерального директора, а его нет на месте, он уехал в командировку и вернется через 3 дня. Что делать сотрудникам фирмы, ведь времени ждать нет, а подделка подписи – подсудное дело. Именно для таких случаев целесообразно заказать факсимиле подписи.

Факсимиле Москва. Как упростить работу с документами.

Факсимиле – это подробное воспроизведение любого рисунка, надписи или знаков. Слово произошло от латинского слова facsimile, которое дословно означает «сделай подобное». Иначе говоря, факсимиле подписи – это оттиск подписи, точно передающий мелкие детали. Такой штамп используется внутри организации для того, чтобы во время отсутствия руководителя или при его высокой загруженности беспрепятственно поставить подпись на внутренних документах предприятия, например, приказах, циркулярах, патентах, сертификатах и прочей документации.

Очевидно, что наличие факсимиле внутри организации существенно упрощает ее работу: нет необходимости в ожидании подписи начальства, достаточно согласовать документ с вышестоящим руководством и дальше, не дожидаясь подписи директора, разместить акт в общем доступе для сотрудников.

Изготовление Факсимиле подписи должно быть качественным

Очевидно, что подпись руководителя организации – самый важный момент в оформлении документации, поэтому к изготовлению факсимиле нужно подойти с особой ответственностью. Недостаточно просто ввести в поисковую строку браузера: «факсимиле заказать в Москве», необходимо тщательно изучить предложения на рынке.

Полиграфия Pechater.ru предлагает качественное изготовление факсимиле в Москве. Полиграфия Pechater.ru – это предприятие с полным циклом собственного производства.  Мы самостоятельно занимаемся изготовлением факсимиле в Москве. Именно поэтому даем гарантию, что произведенные нами печати прослужат как минимум 7-10 лет. В процессе изготовления факсимиле используется только высококачественный полимер и резина. Заказать факсимиле подписи Вы можете на нашем сайте, где сможете выбрать подходящий для вас формат. Время изготовления также зависит от Ваших пожеланий: специалисты компании смогут произвести печать в течение часа, 4 часов или суток. Приятным бонусом является ручная оснастка, которая идет в комплекте с факсимиле подписи. Если Вы уже знаете, какой хотите видеть Вашу будущую печать – замечательно, присылайте макет и мы учтем все пожелания!

Для того, чтобы заказать факсимиле подписи не нужно ехать в наш офис, достаточно просто отправить качественную фотографию подписи на наш электронный адрес, и сотрудники компании начнут производство будущей печати. Приезжать за готовым факсимиле также не требуется – при Вашем желании курьеры «Полиграфии Pechater. ru» в течение дня доставят оттиск в любой район Москвы.

Факсимиле заказать.

Если Вы желаете самостоятельно забрать заказ, то отделение «Полиграфии Pechater.ru» расположено в самом центре Москвы по адресу: Фролов переулок, д.1 офис 105 (станция метро Чистые пруды, Тургеневская, Сретенский бульвар).

Также у нас вы можете заказать: ВИЗИТКИ, ПЕЧАТИ И ШТАМПЫ, ФУТБОЛКИ С ЛОГОТИПОМ, ЛИСТОВКИ, ПЛАКЕТКИ.

Маркировка товаров легкой промышленности и одежды: правила, условия обязательной маркировки 2020 — 2021

Заявка на размещение информации о таможенном складе

Выберите группы товаров

Лекарства

Табак

Обувь

Шины и пневматические покрышки

Духи и туалетная вода

Товары легкой промышленности

Фотоаппараты и лампы-вспышки

Пиво

Молоко

Кресла-коляски

Велосипеды

Шубы

5 ошибок, которые срывают сроки расследования легкого несчастного случая » Официальный сайт городского округа Архангельской области «Мирный»

Ошибка 1.

Сообщают о легком несчастном случае, когда сдают материалы расследования

Некоторые специалисты по охране труда уверены, что отправлять сообщение в ФСС при легких несчастных случаях не нужно. Обосновывают они свое решение тем, что статья 228.1 ТК обязывает извещать только о тяжелых, групповых или смертельных несчастных случаях. Также утверждают, что так как при легком несчастном случае работодатель не обязан включать в комиссию сотрудника ФСС, значит, и нет необходимости незамедлительно сообщать им о происшествии. Поэтому такие специалисты по охране труда сообщают в ФСС о легком несчастном случае уже по факту, когда сдают материалы расследования.

Как правильно. Сообщите в ФСС о легком несчастном случае в течение суток (п. 5 Положения об особенностях расследования несчастных случаев на производстве в отдельных отраслях и организациях, утв. постановлением Минтруда от 24.10.2002 № 73). Такое же требование устанавливает подпункт 6 пункта 2 статьи 17 Федерального закона от 24. 07.1998 № 125-ФЗ. Чтобы оперативно передать сообщение, воспользуйтесь факсом или другими средствами связи. У принимающего лица уточните Ф. И. О., должность, а также время получения сообщения с указанием входящего номера.

Если вы хотите передать сообщение о страховом случае в ФСС лично, подготовьте документ в двух экземплярах: один для адресата, другой для себя. Второй экземпляр с отметкой о получении сохраните вместе с материалами расследования.

Ошибка 2. Неправильно определяют состав комиссии

Если работодатель сформирует комиссию по расследованию несчастного случая из четного количества работников, ФСС признает действия неправомочными. Часто забывают в состав комиссии включить представителя профсоюза или трудового коллектива, что нарушает права пострадавшего. В такой ситуации акт о несчастном случае на производстве могут признать недействительным.

В расследовании тяжелого или смертельного несчастного случая участвуют представители ГИТ и ФСС, которые в процессе помогают специалисту по охране труда скорректировать ошибочные действия. Легкий несчастный случай работодатель расследует самостоятельно. Ошибки обнаружит ФСС уже только при проверке документов.

Как правильно. Издайте приказ о создании комиссии по расследованию несчастного случая из нечетного числа работников. В комиссию включите не менее трех человек:

• специалиста по охране труда или работника, которого работодатель приказом назначил ответственным за организацию работы по охране труда;
• представителей работодателя;
• представителей профсоюзной организации или иного представительного органа работников.

Ошибка 3. Неправильно оформляют документы

Важно!

Расследование легкого несчастного случая комиссия проводит в течение трех дней (ст. 229.1 ТК).

Если специалист по охране труда заполнит документы по расследованию несчастного случая с нарушениями, то их нужно будет переделывать. Большинство ошибок совершают при оформлении акта о несчастном случае на производстве (далее — Акт Н-1). Специалисты по охране труда забывают утвердить его у работодателя или при заполнении не учитывают требования подстрочного текста. Также при сдаче материалов по расследованию в ФСС некоторые не заверяют копии документов.

Как правильно. В формы документов, которые заполняют при расследовании несчастных случаев нельзя вносить свои правки. Чтобы у сотрудников ФСС не было замечаний, их следует заполнять с учетом подстрочного текста.

Акт Н-1 оформляют в трех экземплярах. Один выдают пострадавшему, второй передают в ФСС, а третий работодатель обязан хранить с материалами расследования в течение 45 лет (ст. 230 ТК). Типичные ошибки, которые допускают в Акте Н-1, смотрите в таблице.

Типичные ошибки в Акте Н-1

При заполнении Акта Н-1 комиссия должна последовательно и подробно описать обстоятельства несчастного случая в пункте 8. Если в описании не будет просматриваться причинно-следственная связь между произошедшими событиями и полученной травмой, Акт Н-1 могут вернуть на доработку. Чтобы заполнить пункт 8.1 нужно определить вид происшествия. Ранее для этого использовали специальный классификатор, но на данный момент документ утратил силу. Поэтому используйте приложение 5 к приказу Роструда от 21.02.2005 № 21.

После завершения расследования акт о несчастном случае на производстве подписывают все лица, которые проводили расследование. Утверждают акт у работодателя и заверяют печатью организации при ее наличии. Акт Н-1 может утвердить представитель работодателя. В этом случае к материалам расследования нужно будет приложить копию доверенности или приказа на право утверждения Акта Н-1.

При расследовании несчастного случая комиссия оформляет протоколы: опросов и осмотра места несчастного случая. При их заполнении также нужно внимательно следовать требованиям подстрочного текста. Например, в протоколе опроса в пункте 10 нужно указывать процессуальное положение лиц, участвующих в опросе. Каждый протокол оформляют в единственном экземпляре, а в ФСС предоставляют заверенные копии.

Все копии материалов, которые предоставляете в ФСС, заверьте. Копию считают заверенной, если на ней проставили реквизиты, которые обеспечивают ее юридическую значимость (подп. 25 п. 3.1 ГОСТ Р 7.0.8–2013). Отметку о заверении проставляют, чтобы подтвердить соответствие копии или выписки подлиннику документа (п. 5.26 ГОСТ Р 7.0.97–2016).

Отметка о заверении содержит:

• слово «Верно»;
• наименование должности лица, заверившего копию;
• собственноручную подпись лица, заверившего копию;
• расшифровку подписи в виде фамилии с инициалами;
• дату заверения.

Чтобы проставить отметку о заверении можно использовать штамп. Печать ставят так, чтобы она не захватывала собственноручную подпись лица, который заверил копию, либо в обозначенном для нее месте — «М. П.» (п. 5.24 ГОСТ Р 7.0.97–2016). Печать обязательно нужно проставлять только при ее наличии у организации. Согласно ГОСТу она заверяет подлинность подписи должностного лица.

ЧТО ДЕЛАТЬ, ЕСЛИ

Организация сменила название и реквизиты уже после того, как в ФСС сдали материалы расследования

В документах по расследованию комиссия указывает данные об организации, которые были на момент их составления. ФСС не вправе отменить пособия пострадавшему, если после расследования изменились название и реквизиты организации. Об изменениях обязательно уведомите ФСС. Сделайте это с помощью письма с приложением копий подтверждающих документов.

Ошибка 4. Нарушают сроки сдачи документов в ФСС

Обратите внимание

Проверяйте оформление медицинского заключения. На нем должны быть штамп и печать медицинской организации, дата выдачи, подписи лечащего врача и заведующего отделением (или главного врача)

Комиссия завершила расследование легкого несчастного случая за три календарных дня, и директор вовремя утвердил Акт Н-1. При этом специалист по охране труда решил привезти материалы расследования в ФСС через неделю.

Как правильно. После завершения расследования у работодателя есть три дня, чтобы направить оригинал Акта по форме Н-1 и другие собранные документы в ФСС (ст. 230 ТК). Датой окончания расследования, считают дату, когда руководитель организации утвердил Акт Н-1.

Ошибка 5. Передают в ФСС не все документы

Документы, которые включают в материалы расследования несчастного случая, перечислены в статье 229.2 ТК. Специалист по охране труда собрал документы и на третий день после окончания расследования передал их страховщику. Но такого перечня для ФСС недостаточно.

Как правильно. Отвезите материалы по несчастному случаю в ФСС сразу после окончания расследования, чтобы не нарушить установленный срок. В этом случае, если в Фонде обнаружат, что каких-то документов не хватает, у вас будет время исправить ситуацию.

Перечень документов для конкретного несчастного случая зависит от его характера и обстоятельств. В случае необходимости сотрудники ФСС могут запросить дополнительные документы для квалификации несчастного случая как страхового. Чтобы не ездить в Фонд несколько раз, позвоните и уточните, какие именно документы нужно предоставить.

Когда работник выйдет на работу и сдаст больничный, в ФСС нужно будет направить сообщение о последствиях несчастного случая и копии листка нетрудоспособности с расчетами пособия.

Обязательно составляйте сопроводительное письмо, когда направляете материалы расследования в ФСС. В нем перечислите все документы, которые передаете в Фонд, укажите их количество и объем. Например, «Акт о несчастном случае на производстве по форме Н-1 (оригинал) в 1 экз. на 4 л.». Сделайте сопроводительное письмо в двух экземплярах. Когда будете сдавать материалы расследования, попросите, чтобы сотрудник ФСС поставил отметку о получении с датой приема на вашем экземпляре. Она поможет избежать проблем, если адресат потеряет один из документов или обвинит в нарушении сроков сдачи.

© Материал из КСС «Система Кадры»

В Евросоюзе сожалеют об отзыве США подписи под договором о торговле оружием

Решение США отозвать свою подпись под Международным договором о торговле оружием не будет способствовать усилиям по предотвращению незаконного оборота и борьбе с утечкой обычных вооружений, заявил официальный представитель Европейской внешнеполитической службы (ЕВС).

«ЕС будет и впредь призывать все государства, в частности, основных экспортеров и импортеров оружия, незамедлительно присоединиться к Договору о торговле оружием», — говорится в коммюнике, распространенном в субботу в Брюсселе.

В документе подчеркивается, что Европейский союз решительно поддерживает Международный договор о торговле оружием, который является «ключевым многосторонним инструментом, направленным на укрепление ответственности и транспарентности в международной торговле оружием, а также на предотвращение и искоренение незаконной торговли, что способствует международным усилиям по обеспечению мира, безопасности и стабильности».

В ЕВС отмечают, что все 28 государств-членов ЕС присоединились к этому договору и «полны решимости добиваться его целей, всеобщей ратификации и имплементации».

В Брюсселе указывают на то, что «нерегулируемая торговля оружием продолжает причинять большие страдания во многих частях мира, разжигая конфликты, терроризм и организованную преступность».

По данным ЕВС, стрелковое оружие и легкие вооружения убивают около 500 тыс. человек ежегодно в дополнение к жертвам других видов обычного оружия.

Между тем министр иностранных дел Германии Хайко Маас заявил, что решение Д.Трампа отозвать подпись США под Международным договором о торговле оружием наносит удар по усилиям мирового сообщества проводить улучшения в регулировании торговли оружием.

«Мы сожалеем о решении президента США Дональда Трампа выйти из соглашения о торговле оружием. Данное решение препятствует усилиям международного сообщества по более эффективному регулированию этого вопроса», — написал Х.Маас в микроблоге Твиттер в субботу.

Также он добавил, что Германия будет «продолжать настаивать» на усилении правил в этой сфере.

Как сообщалось, президент США Д.Трамп заявил в пятницу, что его администрация не допустит ратификацию Международного договора о торговле оружием.

Что такое атомные световые сигнатуры? — Разные истины

При нагревании каждый элемент излучает свет с очень специфической и характерной частотой , обнаружено G Устав Кирхгоф и Роберт Бунзен , в 1859 году, сообщает профессор Ашока. Эксклюзив для Different Truths.

Двадцать новых элементов (начиная с открытия цезия в 1860 году) были открыты с помощью одного метода химического анализа. Этот же метод позволяет астрономам определять химический состав звезд на расстоянии миллионов световых лет от нас.Это также позволило физикам понять атомные огни нашего Солнца, которые производят тепло и свет. Этот же метод позволяет другим астрономам вычислять точную скорость и движение далеких звезд и галактик.

Двадцать новых элементов (начиная с открытия цезия в 1860 году) были открыты с помощью одного метода химического анализа. Этот же метод позволяет астрономам определять химический состав звезд на расстоянии миллионов световых лет от нас.

Этим методом является спектрографический анализ, открытие Кирхгофа и Бунзена, который анализирует свет, излучаемый горящими химическими веществами или далекой звездой.Они обнаружили, что каждый элемент излучает свет только на своих определенных частотах. Спектрография дала первое доказательство того, что элементы Земли присутствуют и в других небесных телах — что Земля не была химически уникальной во Вселенной. Их методы обычно используются учеными практически во всех областях науки: биологических, физических и наук о Земле.

Как w as i t Обнаружено?

В 1814 году немецкий астроном Йозеф Фраунгофер обнаружил, что солнечная энергия не излучается равномерно во всех частотах светового спектра, а скорее концентрируется в виде всплесков энергии на определенных частотах.Некоторым это показалось интересным, никто не считал это важным. Идея лежала в бездействии 40 лет.

Густав Кирхгоф был энергичным польским физиком … . В середине 1850-х он сосредоточил свои исследования на электрических токах в Университете Бреслау. В 1858 году, помогая другому профессору в дополнительном проекте, Кирхгоф заметил яркие линии в световом спектре, производимые пламенем, и вспомнил, что читал о подобном случае в статьях Фраунгофера.

Густав Кирхгоф (родился в 1824 г.) был энергичным польским физиком, едва стоявшим на ногах.

ПК: almay.com

пять футов высотой. В середине 1850-х он сосредоточил свои исследования на электрических токах в Университете Бреслау. В 1858 году, помогая другому профессору в дополнительном проекте, Кирхгоф заметил яркие линии в световом спектре, производимые пламенем, и вспомнил, что читал о подобном случае в статьях Фраунгофера. Проведя исследование, Кирхгоф обнаружил, что яркие пятна (или всплески) в свете в результате его исследований пламени имели ту же частоту и длину волны, что и Фраунгофер, обнаруженный в солнечном излучении.

Кирхгоф задумался, что это могло означать, и был поражен тем, что оказалось блестящей идеей: использовать призму, чтобы разделить любой световой луч, который он хотел изучить, на его составные части (вместо того, чтобы смотреть на него через последовательность цветных стеклянных фильтров. как было обычаем дня). Кирхгоф считал, что это позволит ему обнаружить всплески излучения, исходящего от любого горящего газа.

Однако схема не сработала. Пламя, которое он использовал для подогрева газов, было слишком ярким и мешало его наблюдениям.

Появляется Роберт Бунзен, химик немецкого происхождения. В 1858 году 47-летний Бунзен занимался фотохимией — изучением света, испускаемого горящими элементами

PC: posterezzi.com

Представляем Роберта Бунзена, химика немецкого происхождения. В 1858 году 47-летний Бунзен занимался фотохимией — изучением света, испускаемого горящими элементами. Во время этой работы Бунзен изобрел новый вид горелки, в которой воздух и газ смешивались перед сжиганием.Эта горелка (которую мы до сих пор используем и называем горелкой Бунзена) давала очень горячее (более 2700 ° F) пламя, которое давало очень мало света.

Кирхгоф и Бунзен соединились в Гейдельбергском университете в 1859 году. Стоя вместе, Кирхгоф едва достиг плеча Бунзена. Пара объединила идею призмы Кирхгофа с горелкой Бунзена и потратила шесть месяцев на разработку и создание первого спектрографа (устройства для сжигания химических образцов и использования призмы для разделения производимого ими света на спектр отдельных частот).

Они начали каталогизировать спектральные линии (определенные частоты, на которых каждый элемент излучает свою световую энергию) каждого известного элемента и обнаружили, что каждый элемент всегда производит один и тот же «сигнатурный» набор спектральных линий.

Они начали каталогизировать спектральные линии (определенные частоты, на которых каждый элемент излучает свою световую энергию) каждого известного элемента и обнаружили, что каждый элемент всегда производит один и тот же «сигнатурный» набор спектральных линий, которые однозначно определяют наличие этого элемента. элемент.

Вооружившись этим открытием и своим каталогом характерных спектральных линий каждого элемента, Кирхгоф и Бунзен провели первый полный химический анализ морской воды и солнца, доказав, что водород, гелий, натрий и полдюжины других микроэлементов являются общими для Земля существовала в атмосфере Солнца. Это впервые доказало, что Земля не была уникальной в химическом отношении во Вселенной.

Кирхгоф и Бунзен предоставили науке один из самых универсальных и гибких аналитических инструментов

Кирхгоф и Бунзен предоставили науке один из самых универсальных и гибких аналитических инструментов и открыли способ определения состава любой звезды с такой же точностью, как мы определяем серную кислоту, хлор или любое другое соединение.

Интересные факты

Кирхгоф и Бунзен использовали свой спектрограф, чтобы открыть два новых элемента: цезий в 1860 году (они выбрали это название, потому что цезий ™ означает «небесно-голубой», цвет его пламени спектрографа) и рубидий в 1861 году. Этот элемент имеет ярко-красную линию. в его спектрографе. Rubidium co mes от латинского слова красный.

Фото из интернета

розничных продавцов модной одежды могут создать фирменный стиль магазина с помощью различных «световых знаков» Philips

• Philips может создать индивидуальный оттенок белого света (световая подпись), который соответствует идентичности бренда и позиционированию каждого продавца.
• Цветовой тон света (теплее, холоднее) может создать атмосферу, которая подчеркивает идентичность бренда, обеспечивая при этом лучший свет для товаров

В Euroshop (фев.16-20, 2014 г.), Philips, мировой лидер в области освещения, представляет новое решение для светодиодного освещения, которое предлагает брендам индивидуализированные световые подписи, которые помогают формировать имидж их бренда и выделяться на все более конкурентном рынке.

Настраиваемый свет Philips предлагает брендам полную свободу выбора из всего спектра света и определения точной световой сигнатуры — или цветового тона — света, который лучше всего отражает их индивидуальность. Брендам нужны разные вещи от внутреннего освещения, чтобы донести до своих клиентов различные послания, будь то интимность, соотношение цены и качества или роскошь.Световая подпись по-прежнему будет предлагать идеальный свет для товаров, то есть белый цвет будет интенсивным и ярким, а цвета — яркими и насыщенными.

«Исследование, проведенное Philips, показало, как мы себя чувствуем при различных температурах и оттенках цвета. Теплый свет вызывает ощущение открытости и вызывает чувство уюта; поэтому свет свечей (тёплый свет) связан с романтикой. В розничной торговле мы видим теплый свет, позволяющий совершать покупки в роскошных магазинах, где покупатель будет проводить время, расслабляясь и просматривая страницы.Прохладный свет заставляет нас чувствовать себя эффективными и активными, поэтому его можно найти в световых знаках для недорогих, удобных и спортивных магазинов, где покупатели хотят быть внимательными », — сказал Франк ван Сон из Philips Lighting. «Наше новое индивидуальное решение для освещения розничной торговли помогает брендам выделиться, создавая атмосферу, отражающую их индивидуальность».

Идентичность бренда имеет решающее значение: во время усиления конкуренции и роста числа покупок в Интернете покупателям необходимо мгновенно идентифицировать себя со своими любимыми магазинами.Роскошный дом моды, бюджетный магазин одежды или магазин интимного нижнего белья — все они захотят создать другую атмосферу, чтобы привлечь и заинтересовать покупателей, которые в этом случае более склонны проводить время в своем магазине и, в конечном итоге, свои деньги.

Благодаря индивидуальной световой подписи магазины могут освещать всю свою продукцию в самых выгодных условиях. Покупатели видят всю одежду в ее истинном цвете, но в среде бренда, которую они мгновенно узнают. Хотя эти световые сигнатуры создают совершенно разные атмосферы, все они обеспечивают наилучшее освещение для товаров, позволяя просвечивать как насыщенные белые, так и глубокие, насыщенные цвета.

Philips исследовала предпочтения световой подписи среди различных типов розничных продавцов модной одежды, как показано ниже;

• Магазин нижнего белья с богатыми тканями, шелком и кружевом создаст чувственную и интимную — даже сексуальную — атмосферу.Декор будет роскошным, а освещение должно дополнять и подчеркивать его. Легкая подпись будет теплой с розоватым и, возможно, красноватым оттенком, чтобы создать чувственную атмосферу для клиентов.
• С другой стороны, бюджетный магазин может захотеть создать простой, минималистичный и чистый вид, проецируя ценность и простоту с помощью холодного белого света. Это также популярная световая подпись в магазине деловой одежды или в магазине спортивной одежды для создания четкой и активной среды.
• Дом моды премиум-класса или городской магазин джинсовой ткани могут захотеть создать привлекательный, крутой и атмосферный имидж бренда.В световой подписи будет использоваться теплый белый цвет.

Отказ от гарантий
1. Веб-сайт не гарантирует следующее:
1.1 Услуги веб-сайта соответствуют вашим требованиям;
1.2 Точность, полнота или своевременность обслуживания;
1.3 Правильность, достоверность выводов, сделанных при использовании сервиса;
1.4 Точность, полнота, своевременность или безопасность любой информации, которую вы загружаете с веб-сайта
2.Услуги, предоставляемые сайтом, предназначены только для ознакомления. Веб-сайт не несет ответственности за инвестиционные решения, убытки или другие убытки, возникшие в результате использования веб-сайта или информации, содержащейся на нем.

Права собственности

Вы не можете воспроизводить, изменять, создавать производные работы, демонстрировать, выполнять, публиковать, распространять, распространять, транслировать или передавать третьим лицам любые материалы, содержащиеся в услугах, без явного предварительного письменного согласия веб-сайта или его законного владельца.

Раскрытие светоспецифических метаболических и регуляторных признаков риса с помощью моделирования на основе силикона и мультиомного анализа

• © 2015 Американское общество биологов растений. Все права защищены.

Abstract

Качество света — важный сигнальный компонент, с помощью которого растения организуют различные морфологические процессы, включая прорастание семян и фотоморфогенез проростков.Однако до сих пор неясно, как растения, особенно пищевые культуры, воспринимают различные световые качества и регулируют рост своих клеток и другие процессы развития. Поэтому в этой работе мы первоначально профилировали транскрипты модельной культуры риса ( Oryza sativa ) при четырех различных световых воздействиях (синий, зеленый, красный и белый), а также в темноте. Одновременно мы реконструировали полностью расчлененную на уровне генома метаболическую модель клеток риса, i OS2164, содержащую 2164 уникальных гена, 2283 реакции и 1999 метаболитов.Затем мы объединили модель с профилями транскриптомов, чтобы выяснить светоспецифические транскрипционные сигнатуры метаболизма риса. Очевидно, световые сигналы опосредуют экспрессию генов риса, по-разному регулируя многочисленные метаболические пути: фотосинтез и вторичный метаболизм активируются в синем свете, тогда как деградация резервных углеводов выражена в темноте. Топологический анализ данных экспрессии генов с помощью метаболической модели в масштабе генома риса также показал, что фитогормоны, такие как абсцизат, этилен, гиббереллин и жасмонат, являются ключевыми биомаркерами опосредованной светом регуляции, и последующий анализ промотора связанных генов. регионов идентифицировали несколько светоспецифичных факторов транскрипции.Наконец, транскрипционный контроль метаболизма риса с помощью сигналов красного и синего света был оценен путем интеграции данных транскриптома и метаболома с моделированием на основе ограничений. Биологические идеи, полученные в результате этого интегративного подхода системной биологии, предлагают несколько потенциальных приложений, таких как улучшение агрономических характеристик пищевых культур и разработка светоспецифичных синтетических генных цепей в системах микробов и млекопитающих.

Свет является основным источником энергии, а также ключевым сигнальным элементом для роста и развития растений.Хотя количество света (плотность потока) и качество (длина волны) важны для жизни растений, последнее является важным индикатором окружающей среды для растений, позволяющим модулировать их рост и морфологические процессы, такие как прорастание семян, удлинение стебля, фототропизм, циркадные ритмы и цветение. индукция (Neff et al., 2000). С момента открытия стимулированного красным светом (R) прорастания семян салата-латука ( Lactuca sativa ; Borthwick et al., 1952), несколько исследований были сосредоточены на изучении влияния качества индивидуального света на рост и развитие растений.В более ранних работах использовались классические генетические и молекулярные подходы, такие как использование мутантов с дефицитом световой сигнализации, измерение активности ферментов и уровней ферментов / метаболитов определенного пути (путей). Однако необходимо всесторонне исследовать метаболизм растений, потому что изменение качества света может влиять на физиологию растений, модулируя несколько метаболических эффекторов и сигнальных каскадов почти на всех уровнях клеточной иерархии. Соответственно, биологи растений в современную геномную эру приняли омические технологии, такие как транскриптомика (Ma et al., 2001; Тепперман и др., 2001; Wang et al., 2001), протеомике (Kim et al., 2006b) и метаболомике (Jung et al., 2013), что позволяет проводить высокопроизводительный анализ световых сигнальных механизмов в модельном растении эвдикот Arabidopsis ( Arabidopsis thaliana ). Из них наиболее широко использовалось профилирование транскриптов по всему геному, выделяя несколько заметных черт, включая массовое перепрограммирование экспрессии генов между фотоморфогенезом и скотоморфогенезом, скоординированную регуляцию транскрипции между несколькими клеточными путями в определенных светлых тонах (Ma et al., 2001), критическая роль рецептора R фитохрома A ( phyA ) для роста клеток под светом (Tepperman et al., 2001) и конститутивно опосредованная фотоморгенезом1 регуляция развития проростков синим светом (B). (Ван и др., 2001).

Хотя механизмы трансдукции света в основном были охарактеризованы с использованием модельного растения Arabidopsis в целом, относительно мало известно о однодольных пищевых культурах, таких как рис ( Oryza sativa ), пшеница ( Triticum aestivum ) и кукуруза. ( Zea mays ).В этом отношении растущая доступность информации о геноме риса (International Rice Genome Sequencing Project, 2005) позволила провести несколько полногеномных исследований, и исследования уже изучали различия между двудольными и однодольными с точки зрения восприятия света и фотоморфогенеза. Среди них наиболее заметным различием является количество доступных фоторецепторных генов, особенно генов phy , и их индивидуальные функциональные роли: у арабидопсиса пять генов, от phyA до phyE , тогда как у риса только три, от phyA до phyC (Takano et al., 2009). Более того, сравнительный анализ транскриптома арабидопсиса и риса при обработке на свету и / или в темноте (D) выявил еще несколько отличительных характеристик: (1) паттерны экспрессии генов более консервативны при фотоморфогенезе, но не при скотоморфогенезе (Jiao et al. ., 2005), и (2) рост листьев у Arabidopsis более строго контролируется циркадными ритмами даже при непрерывном освещении, чем у риса (Poiré et al., 2010). В совокупности эти различия подчеркивают важность понимания свето-опосредованных сигнальных механизмов риса, чтобы знания, полученные в результате таких исследований, можно было использовать для управления агрономическими характеристиками сельскохозяйственных культур с целью их улучшения.С этой целью в данном документе мы используем подход системной биологии, в котором широко доступные наборы данных omics могут быть исследованы в сочетании с прогностическими вычислительными моделями.

Параллельно с высокопроизводительным омиксным анализом достижения в области геномных технологий также ускорили развитие крупномасштабных вычислительных моделей и связанных с ними методов моделирования для анализа клеточного поведения (Lee et al., 2005). Метаболическое моделирование и анализ in silico на основе ограничений — один из хорошо зарекомендовавших себя методов для выяснения физиологического поведения и метаболических состояний организма при различных экологических / генетических изменениях, поскольку он систематически фиксирует взаимосвязь генотип-фенотип из аннотации генома, биохимической и физиологические данные клеток (Lewis et al., 2012; Лакшманан и др., 2014). Более того, эти модели могут контекстуализировать множественные омические данные с помощью нескольких интегративных анализов, как таковых, обеспечивая уникальную биологическую информацию на системном уровне (Hyduke et al., 2013). Несколько моделей на основе ограничений были разработаны в масштабе генома для широкого круга микробов и млекопитающих (Kim et al., 2012b), включая людей (Duarte et al., 2007), и некоторых растений, таких как Arabidopsis (Poolman et al., 2009; Saha et al., 2011; Mintz-Oron et al., 2012; Chung et al., 2013), кукурузы (Saha et al., 2011; Simons et al., 2014) и риса (Poolman et al., 2013). Среди них метаболическая модель в масштабе генома человека (GEM) была интегрирована с данными транскриптома и протеома, чтобы охарактеризовать механизмы регуляции транскрипции и метаболические фенотипы различных заболеваний, которые нельзя было расшифровать ни по одному из них (Zelezniak et al., 2010; Hu et al., 2013; Mardinoglu et al., 2014). Для растений данные транскриптома были успешно интегрированы с Arabidopsis GEM, чтобы понять его метаболическую акклиматизацию в различных условиях освещения и / или температуры (Töpfer et al., 2013, 2014). Точно так же здесь мы объединили GEM клеток риса с множественными данными омиков, чтобы выявить гетерогенность опосредованной светом транскрипционной регуляции клеточного метаболизма различных цветов.

Общий подход к этому исследованию проиллюстрирован на Рисунке 1. Сначала мы профилировали транскрипты растений риса, выращенных при различном светодиодном (LED) освещении, а в D. Параллельно мы реконструировали полностью курированный, полностью разделенный на секции GEM клетки риса, что позволяет нам интегрировать данные об экспрессии генов в топологию метаболической сети для систематической характеристики светоспецифичных транскрипционных ответов на нескольких уровнях клеточной иерархии: системы, пути, индивидуальные реакции и метаболиты.Используя биомаркеры, идентифицированные в результате такого интегративного исследования, мы затем исследовали предполагаемые цис-действующие регуляторные элементы для потенциальных факторов транскрипции (TF), которые специфически функционируют со светом. Наконец, данные метаболома также использовались в сочетании с моделированием in silico в масштабе транскриптома и генома для выяснения метаболического разнообразия между красным и синим цветами.

Рисунок 1.

Схематическая иллюстрация систематической структуры, объединяющей in silico моделирование и анализ данных omics.Растения риса выращивали при пяти различных световых обработках, и были профилированы метаболом и транскриптом. Одновременно GEM риса реконструировали на основе аннотации генома, биохимических данных и литературных источников. Затем данные модели и омики были систематически объединены для определения ключевых светоспецифичных регуляторных и метаболических сигнатур. PCA, анализ главных компонентов; PLS-DA, частичный дискриминантный анализ методом наименьших квадратов.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Раскрытие гетерогенности опосредованных светом метаболических фенотипов и регуляции транскрипции у риса

Чтобы сравнить влияние различного качества света на рост растений и клеточный метаболизм, мы выращивали растения риса в светодиодных камерах в пяти условиях: B (450 нм), зеленый свет (G; 530 нм), R (660 нм), белый свет (W; смесь B, G и R) и D (без световой обработки; рис.1). При каждой световой обработке поток фотосинтетических фотонов (PPF) на верхушках растений поддерживался на уровне 94 мкмоль м ^-2 с ^-1 . Здесь следует отметить, что этот коэффициент плотности потока фотонов распределялся по-разному во всех трех вариантах обработки цветным светом, так что камеры B, R и G получали 100% B, R и G соответственно. Камера W была разработана для получения равного количества всех трех цветных источников света («Материалы и методы»; Рис. 1).

Как и ожидалось, растения, выращенные при разном освещении, демонстрировали различные фенотипы: более короткое растение с более широкой шириной и большим углом листовых пластинок в B, бледно-желтое растение с большей длиной колеоптиля и очень низкой живой массой в D и сравнительно схожие структуры у W, G и R (рис.2А; Дополнительный рис. S1; Дополнительный набор данных S1). Такое специфичное для света фенотипическое разнообразие растений, особенно в B и D, может быть охарактеризовано соответствующими внутриклеточными вторичными метаболитами, которые в основном присутствуют в листьях. Таким образом, мы количественно определили терпеноиды и фенольные соединения, в результате чего было получено наибольшее количество в B и наименьшее в D, следуя порядкам B> W> G> R >> D и B> W> R> G >> D, соответственно (« Материалы и методы »; рис. 2Б). Эти последовательные результаты подтвердили, что усиленный фотосинтез в B может усиливать синтез терпеноидов, приводя к более широким пластинкам листьев, за счет регуляции транскрипции соответствующих биосинтетических генов с уровнями экспрессии, которые, возможно, модулируются определенными световыми цветами (Ma et al., 2001; Цзяо и др., 2005). Поэтому для анализа опосредованных светом паттернов регуляции транскрипции профили экспрессии генов проводили с помощью полногеномного 3’Tiling Microarray (Roche NimbleGen, Inc.), разработанного с использованием 27 448 генов, депонированных в Международном проекте по секвенированию генома риса, Rice Annotation База данных проекта (http://rapdb.dna.affrc.go.jp/). Среди 27 448 транскриптов 20 507 генов основаны на поддержке полной комплементарной ДНК (кДНК) / EST в базе данных RAP, а остальные 6941 ген имеют частичные последовательности кДНК / EST.Отсканированные сигналы гибридизации микроматрицы оцифровывали и анализировали с помощью Nimblescan (Roche NimbleGen, Inc.). Наконец, данные были вручную проверены и нормализованы, чтобы минимизировать экспериментальные вариации и устранить шум перед дальнейшей обработкой («Материалы и методы»).

Рисунок 2.

Светорегулируемое морфологическое разнообразие растений риса. A: изображение растений риса, выращенных при непрерывном освещении различными источниками света (B, G, R и W), а также D. B, каротиноиды и общее содержание фенолов при каждой световой обработке и D.GAE, эквивалент галловой кислоты.

Реконструкция полностью компартментализованного GEM клеток риса и картирование данных транскриптома

Мы расширили нашу предыдущую модель центрального метаболизма риса (Lakshmanan et al., 2013) до полностью подобранной GEM, которая может быть интегрирована с данные экспрессии генов, чтобы точно определить регуляторные метаболические горячие точки с топологической точки зрения (Zelezniak et al., 2010; Mardinoglu et al., 2014). По сути, реконструкция модели включает три ключевых этапа: (1) компиляция метаболических генов и связанных реакций из аннотаций генома риса, биохимических баз данных и других литературных источников; (2) ручное лечение метаболических реакций путем проверки элементного баланса и направленности реакций, разработки карт ген-белковой реакции (GPR) и определения надлежащих субклеточных компартментов; и (3) идентификация тупиков и ручное заполнение сетевых пробелов на основе литературных источников (подробные процедуры см. в разделе «Материалы и методы» и на дополнительном рисунке S2).Последний GEM риса, i OS2164, составляет 2164 уникальных гена, 2283 реакции и 1999 метаболитов, локализованных в семи внутриклеточных компартментах: цитозоле, пластиде, митохондрии, пероксисоме, эндоплазматическом ретикулуме, вакуоли и тилакоиде (рис. 3). Подробный список метаболической сети i OS2164, содержащей различные гены, реакции и метаболиты, можно получить из дополнительного набора данных S2; а также он доступен в виде файла языка разметки системной биологии (уровень 2, версия 1; http: // sbml.org /; Дополнительный набор данных S4). Следует отметить, что присутствие GPR в и OS2164 позволило нам сопоставить данные транскриптома, где уровни экспрессии 1915 метаболических генов, относящихся к 1659 реакциям, могут быть связаны с моделью для дальнейшего анализа.

Рисунок 3.

Сетевые характеристики и предсказания фенотипа i OS2164. A, Раздельная сетевая диаграмма i OS2164, где разные пути выделены разными цветами, а во вложенной таблице обобщены свойства модели.B. Распределение реакций по различным путям в и OS2164. C. Прогнозы модели, зависящие от длины волны, в сравнении с экспериментально полученными спектрами фотосинтетического действия. D, Сравнение in silico и экспериментального роста прорастающих клеток семян. Спектры фотосинтетического действия при отдельных цветах света были смоделированы путем максимизации биомассы листа при ограничении поглощения фотонов соответствующей длины волны на уровне 100 ммоль г ^-1 сухой массы клеток (DCW) ч ^-1 , и полученная тенденция сравнивается с тенденция, о которой сообщалось ранее (Bowsher et al., 2008). Клеточный рост нефотосинтетических клеток моделировали с использованием ранее опубликованных данных периодического культивирования клеток риса, выращенных на Suc и Glc в аэробных и анаэробных условиях (Lakshmanan et al., 2013). Сетевая диаграмма с высоким разрешением также доступна в Supplemental Data S5. GPR, ген-белок-реакция; TCA, трикарбоновая кислота; тРНК, транспортная РНК.

Во время реконструкции были предприняты значительные усилия для разработки и OS2164 как наиболее полной модели метаболизма риса.Очевидно, что он более обширен, чем предыдущий (Poolman et al., 2013) с точки зрения охвата метаболических путей, соответствующей субклеточной локализации реакций, подробного учета электронного транспортного метаболизма как в пластиде, так и в митохондриях, улучшенной сетевой связности и низкой процент заблокированных реакций (для тщательного сравнения см. дополнительный рисунок S3 и дополнительный набор данных S1). Примечательно, что i OS2164 — первая модель растения, насколько нам известно, для учета всех возможных реакций переноса электронов в митохондриях, пластидах и тилакоидах, включая реакции фотофосфорилирования под действием света, в зависимости от длины волны.Фотосинтез на различных длинах волн в видимой области спектра был смоделирован с использованием подхода, предложенного в модели Chlamydomonas reinhardtii , i RC1080 (Chang et al., 2011). Поскольку метаболические реакции поглощения фотонов, такие как PSI и PSII, в и RC1080 рассматривают только диапазоны R и B, мы внесли поправки в эти реакции, чтобы охватить все длины волн в видимом спектре на основе данных по поглощательной способности (для подробных процедур см. «Материалы и методы»).Следует отметить, что всего 35 реакций, обозначающих спектральное разложение по длине волны, были включены в и OS2164.

После реконструкции рисового GEM мы выполнили несколько тестов, чтобы подтвердить его прогностическую способность. Во-первых, модель была оценена для моделирования 46 известных метаболических функций, включая биосинтез и деградацию аминокислот и вторичных метаболитов, таких как терпеноиды и фенольные соединения. Во-вторых, способность i OS2164 моделировать спектры фотосинтетического действия (скорость эволюции O ₂ из фотосинтеза) на всех возможных длинах волн в видимом спектре (Bowsher et al., 2008) был протестирован и оказался достаточно коррелированным ( R ² = 0,6641; рис. 3C). В-третьих, предсказания модели для нефотосинтетических клеток были подтверждены с использованием ранее опубликованных данных периодического культивирования рисовых клеток, выращенных на Suc и Glc в аэробных и анаэробных условиях (рис. 3D; Lakshmanan et al., 2013).

Оценка роли альтернативных путей потока электронов во время фотосинтеза и роста клеток с использованием

i OS2164

Фотосинтезирующие организмы используют различные пути потока электронов для генерации окислительно-восстановительной энергии из световой энергии в виде АТФ и НАДФН.Путь линейного электронного потока (LEF), при котором электроны текут от PSII к PSI через комплекс цитохрома b6f и ферредоксин NADP ⁺ -оксидоредуктазу, является наиболее широко используемым путем (Allen, 2002). Кроме того, растения также обладают другими путями альтернативного потока электронов (AEF), такими как циклический поток электронов (CEF) и реакция Мелера для выработки необходимой окислительно-восстановительной мощности (рис. 4A). Хотя физиологические роли путей AEF не ясны, предполагается, что они работают вместе с LEF (Allen, 2003).Таким образом, чтобы оценить возможный вклад AEF в фотосинтез и рост клеток, здесь мы систематически выполняли моделирование потока in silico с использованием i OS2164.

Рисунок 4.

Вклад различных путей электронного потока в фотофосфорилирование. A, схематическая иллюстрация цепей переноса электронов пластидных / тилакоидных мембран, включенных в i OS2164, показывающая схему Z , циклический поток и реакцию Мелера. B, скорость роста дикого типа.C — отношение PSI к PSII дикого типа. D, скорость роста мутанта CEF. E, отношение PSI к PSII мутанта CEF. F, скорость роста мутанта MEHLER. G, отношение PSI к PSII мутанта MEHLER. H, скорость роста двойного мутанта. I, отношение PSI к PSII двойного мутанта. Отношение PSI к PSII рассчитывали путем деления потока PSI на поток PSII. АТФС, АТФ-синтаза; C / bf6, комплекс цитохрома b6f; Fd, ферредоксин, NDH, NAD (P) H дегидрогеназа; пк, пластоцианин; pq, пластохинон; PTOX, терминальная оксидаза пластид.

Первоначально мы исследовали фототропный рост листьев риса при различном освещении и скорости поглощения CO ₂ , максимизируя соответствующее уравнение биомассы. Это моделирование показало, что все три пути потока электронов несут заметные потоки при достижении максимальной скорости роста, предполагая, что AEF, возможно, работает все время (данные не показаны). Впоследствии, вклад отдельных путей потока электронов в фотосинтез и рост клеток был вычислен путем ограничения каждого пути AEF на ноль последовательным образом.Интересно, что результирующий фотосинтез и рост клеток при высокой интенсивности света сильно зависели от путей AEF. Из Рисунка 4C можно было наблюдать, что отношение PSI к PSII резко возрастает при высокой интенсивности света и низком поглощении углерода, что подчеркивает гибкость путей AEF, особенно CEF. В таких условиях растения все чаще используют CEF около PSI вместо использования LEF для рассеивания избыточной энергии; любой избыток НАДФН, произведенный из LEF сверх порогового значения, не может быть использован в цикле Кальвина из-за низкого поглощения CO ₂ .Растения без CEF все еще жизнеспособны, но растут с субоптимальной скоростью роста (рис. 4D), подтверждая, что CEF действительно способствовал максимальному росту у дикого типа. Примечательно, что эти мутанты поддерживали равное отношение PSI к PSII, потому что они не могли рециркулировать избыточную окислительно-восстановительную мощность только с PSI (рис. 4E). В отличие от мутантов CEF, растения, у которых отсутствует реакция Мелера, растут со скоростью, очень близкой к скорости роста дикого типа (≤0,02%), что позволяет предположить, что вклад этого AEF в фотофосфорилирование незначителен по сравнению с CEF (рис.4F). Наконец, мы также оценили скорость роста и соотношение PSI к PSII двойных мутантов (т. Е. Растений, лишенных как CEF, так и реакции Мелера), и обнаружили, что результаты очень похожи на результаты мутантов CEF (рис. 4, H и I. ).

Глобальный анализ экспрессии метаболических генов

Глобальные паттерны экспрессии метаболических генов при различных световых воздействиях были исследованы двумя разными методами: (1) построение логарифмических значений экспрессии ₂ для любых двух условий попарно и (2) анализ главных компонент .В целом, относительные различия между любыми двумя состояниями были последовательно идентифицированы обоими методами (рис. 5A). Неудивительно, что паттерн экспрессии D заметно отличается от всех других световых обработок. Среди условий освещения B и R показали самые разные паттерны экспрессии ( R ² = 0,9167), тогда как G и W имели самые низкие различия в экспрессии генов ( R ² = 0,9883), что согласуется с наблюдаемые фенотипы (рис. 2А).Более тщательное изучение графиков экспрессии log ₂ (фиг. 5A) дополнительно выявило специфические паттерны повышающей или понижающей регуляции между любыми двумя условиями. Например, при сравнении RW большая часть генов активируется в W, тогда как в BR гены в основном подавляются в R. Интересно, что аналогичный результат кластеризации наблюдался при анализе главных компонент данных метаболома из идентичных экспериментов. (Jung et al., 2013). Таким образом, экспрессия метаболических генов и профили метаболома потенциально коррелируют друг с другом.

Рисунок 5.

Опосредованные светом паттерны регуляции транскрипции риса, идентифицированные с использованием i OS2164. А. Общий анализ экспрессии метаболических генов при различных световых воздействиях. Диаграммы разброса показывают попарное сравнение средних значений логарифмической экспрессии гена ₂ между различными световыми обработками, тогда как на вставке показан анализ основных компонентов данных транскриптома в каждом состоянии. B, уровни экспрессии отдельных метаболических путей. C. Дифференциальное выражение индивидуальных реакций.D, Обогащение 20 основных репортерных метаболитов в генах с повышенной и пониженной регуляцией. Повышающая и понижающая регуляция в каждом состоянии определялась с использованием W. Интенсивность цвета на тепловой карте и диаграмме сети указывает на значимость повышающего или понижающего регулирования, а не кратного изменения. В целях наглядности представлен отрицательный или положительный логарифм ₁₀ значения P . Аббревиатуры метаболитов и полный список репортерных метаболитов см. В дополнительных данных S2 и S3 соответственно.TCA, трикарбоновая кислота; тРНК, транспортная РНК.

Мы также проанализировали общий характер экспрессии генов всего микроматрицы, включая неметаболические гены, что привело к аналогичным результатам (дополнительный рисунок S4). Однако разница между паттернами экспрессии W и G немного выше при рассмотрении всех генов ( R ² = 0,9719 по сравнению с R ² = 0,9883), что, по-видимому, свидетельствует о том, что большинство транскрипционных изменений между W и G может встречаться в неметаболических генах.

Изменения экспрессии отдельных метаболических путей

После глобального анализа метаболических генов мы исследовали повышающую и понижающую регуляцию отдельных метаболических путей при лечении G, B, R и D по сравнению с W. Значение таких Изменения экспрессии в метаболических путях рассчитывали с использованием знакового рангового критерия Вилкоксона, скорректированного для проверки множественных гипотез («Материалы и методы»). Результаты представлены на Фигуре 5B, где интенсивность цвета обозначает статистическую значимость дифференциального выражения.

Анализ индивидуальных путей раскрыл активацию нескольких пластидных путей, таких как фотосинтез; биосинтез терпеноидов; метаболизм крахмала и Suc; Цикл Кальвина; Метаболизм Phe, Tyr и Trp; Метаболизм GA и биосинтез абсцизата (ABA) в B (рис. 5B). Следует отметить, что активация нескольких путей биосинтеза вторичных метаболитов согласуется с нашими наблюдениями за высшими терпеноидами и фенольными соединениями в B (Fig. 2B). Более того, повышающая и понижающая регуляция биосинтеза АБК и этилена, соответственно, в B четко объясняет фенотип коротких растений: известно, что накопление АБК снижает биосинтез стимулятора роста растений, этилена, тем самым подавляя рост стеблей ( Hoffmann-Benning and Kende, 1992).При лечении R несколько путей, включая фотосинтез и цикл Кальвина, показали значительное подавление регуляции по сравнению с W. Опять же, эти наблюдения полностью согласуются с более ранними экспериментами, которые показали, что эти пути активируются в R, дополненном B, а не R только (Goins et al., 1997). В отличие от R и B, которые продемонстрировали явную повышающую или понижающую регуляцию метаболических путей, у D. Ожидается, что фотосинтез значительно подавлен, тогда как метаболизм аминокислот, деградация жирных кислот, метаболизм крахмала и Suc. , и окислительное фосфорилирование были активированы в D, что позволяет предположить, что в отсутствие фотосинтеза растения могут разлагать доступный запасной углерод, чтобы выжить в таких стрессовых условиях (Kunz et al., 2010).

Мы также количественно определили специфическое для света функциональное обогащение различных биологических процессов, используя DAVID (Huang et al., 2007) на основе терминов генной онтологии (GO; BP: GO). Этот дополнительный подход идентифицировал катаболизм углеводов (GO: 0016311, GO: 0044036, GO: 0006022, GO: 0006026, GO: 0006030 и GO: 0006032) от активированных генов в D и биосинтез изопреноидов (GO: 0008299) в B (Дополнительный рис. S5) как уникальные биологические процессы в соответствующих светлых тонах, которые постоянно наблюдаются при анализе индивидуальных путей.Интересно, что клеточные процессы, такие как транскрипция (GO: 0006350) и ее регуляция (GO: 0006355), также были обогащены подавляемыми генами B, что позволяет предположить, что большинство фенотипических изменений в B можно в основном отнести к различия в процессах транскрипции.

Изменения экспрессии индивидуальных реакций и репортерных метаболитов

Затем мы исследовали паттерны экспрессии на уровне индивидуальных реакций и метаболитов. Дифференциальное выражение каждой реакции при различных световых воздействиях сначала анализировали попарно с использованием модифицированной статистики t , скорректированной для проверки нескольких гипотез («Материалы и методы»).Рассматривая W в качестве эталона, большинство реакций в B активируются, тогда как D и R имеют большое количество подавленных реакций, что сходным образом идентифицируется при общем анализе (рис. 5C). Полный список реакций, которые по-разному выражаются во всех сравнениях (например, B против W, R против W, G против W и D против W), представлен в дополнительном наборе данных S3.

Из списка реакций с наиболее значительными транскрипционными изменениями мы затем выполнили анализ репортерных метаболитов (Patil and Nielsen, 2005), чтобы найти метаболические горячие точки в рисовой сети, которые имеют общий механизм регуляции транскрипции («Материалы и методы» »).20 наиболее статистически обогащенных репортерных метаболитов в каждой из световых обработок представлены на фиг. 5D (оценки обогащения репортерных метаболитов для всех соответствующих метаболитов см. В дополнительном наборе данных S3). Следует отметить, что при сравнении G и W нет репортерного метаболита из-за очень схожих паттернов экспрессии ( R ² = 0,9883), что приводит к небольшому физиологическому различию. В целом, ведущие репортерные метаболиты в основном связаны с биосинтезом терпеноидов, метаболизмом GA, биосинтезом индол-3-уксусной кислоты (IAA), биосинтезом ABA, метаболизмом аминокислот и метаболизмом Suc и крахмала.В частности, репортерные метаболиты были в основном связаны с фитогормонами, такими как GA, этилен и ABA, при сравнении B и W (рис. 5D). Таким образом, они могут быть предложены как ключевые биомаркеры более короткого фенотипа растений. Сходным образом, сравнение R и W идентифицировало репортерные метаболиты вдоль путей терпеноидов, IAA и GA, где большинство генов сильно подавлено, что ясно указывает на снижение доступности фитогормонов в R (Jones et al., 1991). Однако этилен и его предшественник, 1-аминоциклопропан-1-карбоксилат, были связаны с активируемыми генами в R, что объясняет опосредованное этиленом удлинение гипокотиля под W или R, но не с B.Дополнительный рисунок S6 обеспечивает сетевую визуализацию репортерных метаболитов высшего ранга и паттерны экспрессии соседних генов.

Перекрывающиеся и уникальные репортерные метаболиты высшего ранга (значение P <0,05) среди различных обработок светом были затем включены в короткий список для определения общих и различных биомаркеров регуляции транскрипции, соответственно. Из этого сравнения мы определили 32 метаболита в качестве общих индикаторов во всех трех состояниях (то есть B, R и D; дополнительный набор данных S3).Примечательно, что большинство этих метаболитов происходит из биосинтеза ИУК, биосинтеза жасмоната и метаболизма ГА. Действительно, эти фитогормоны играют глобальную роль в метаболизме растений и специфически реагируют на различные раздражители окружающей среды. Интересно, что в отличие от других сравнений, D по сравнению с W демонстрирует большое количество репортерных метаболитов метаболизма жирных кислот и углеводного обмена, подтверждая, что эти пути функционально активны в отсутствие фотосинтеза.

Анализ мотивов дифференциально экспрессируемых метаболических генов

После идентификации репортерных метаболитов при каждой световой обработке мы дополнительно проанализировали промоторные области соседних с ними генов с повышенной и пониженной регуляцией, чтобы связать их с регуляторными путями, которые модулируют экспрессию их генов. .Здесь, в отличие от традиционного подхода, который рассматривает весь набор дифференциально экспрессируемых генов, гены, которые организуют согласованные изменения метаболизма, были использованы для идентификации вероятных мотивов последовательности связывания TF (Zelezniak et al., 2010). Этот анализ позволил нам выявить ряд светоспецифичных ТФ, которые по-разному регулируют уровни фитогормонов растений через экспрессию соответствующих биосинтетических генов и, таким образом, фенотип растения в условиях B, R и D (Таблица I).

Таблица I. Список TF с общими показателями обогащения целевых мотивов среди активируемых и подавляемых генов, соседних с репортерными метаболитами, при лечении B по сравнению с W, R по сравнению с W и D по сравнению с W

Примечательно, что анализ промотора подтвердил чувствительность B ключевого белка bZIP, HY5, который, как известно, положительно реагирует на B посредством специфического взаимодействия с мотивом G-бокса и впоследствии обеспечивает световой контроль экспрессии генов (Chattopadhyay et al., 1998). Кроме того, многие другие группы TF bZIP G-типа, такие как GBF1, GBF2, CPRF5, CPRF6 и CPRF7, были идентифицированы как B-специфические, что хорошо согласуется с более ранними сообщениями (Schindler et al., 1992; Кирчер и др., 1998). Также было установлено, что различные уникальные TF предположительно являются специфичными для B или R. Например, значительное обогащение мотивов, связанных с ТФ R2R3 MYB, MYB1, MYB2, MYB5, MYB15 и MYB30, в активируемых генах R по сравнению с W (таблица I) указывает на то, что эти TF, возможно, реагируют на R. среди них MYB1, как было показано, обладает общим светоспецифическим ответом (Feldbrügge et al., 1997). Точно так же TF ZnF, такие как ZCT1, ZCT2 и ZCT3, и WRKY TF определены как B-специфические (Таблица I).В общей сложности мы идентифицировали 62 и 65 TF, которые должны реагировать на R и B соответственно. Достоверность нашего анализа промоторов была дополнительно оценена путем сравнения полученного списка TF с существующими литературными данными, в результате чего было обнаружено, что 9 и 22 TF прямо или косвенно связаны с R и B, соответственно (результаты сравнения см. В дополнительном наборе данных S3). .

Моделирование на основе ограничений, зависящих от длины волны, раскрывает метаболические сигнатуры цветов B и R и дополняет данные о метаболомике неоднородность их клеточного метаболизма посредством комплексного анализа метаболомики и моделирования на основе ограничений.С этой целью мы сначала оценили различия в уровнях метаболитов между двумя состояниями, используя ранее опубликованные данные метаболома (Jung et al., 2013), тем самым идентифицировав 18 из 43 измеренных (значение

P <0,05). Из рисунка 6A видно, что все аминокислоты и жирные кислоты присутствуют в больших количествах в B, тогда как сахара, такие как Glc, Suc и Fru, присутствуют в большом количестве в R.

Рисунок 6.

Метаболические и регуляторные подписи риса в B и R.A, Сравнение внутриклеточных уровней метаболитов в R и B. Метаболиты со значительным изменением ( P <0,05) выделены над пунктирной линией. B. Центральная метаболическая карта риса, показывающая различия в метаболических потоках, полученных путем случайной выборки после применения ограничений, основанных на данных транскриптома. Вычисленные различия между масштабируемыми потоками, умноженные на большое целое число (например, 10 ⁶ ) для целей визуализации. Кратные изменения (FC) как в уровнях метаболитов, так и в различиях потоков рассчитываются с использованием R.Аббревиатуры метаболитов и реакций см. В дополнительных данных S2.

Как подчеркивалось ранее, i OS2164 включает реакции фотофосфорилирования под действием света в зависимости от длины волны. Таким образом, мы можем проанализировать дифференциальное использование различных метаболических путей в цветовых режимах B и R. Для этого мы сделали выборку из пространства решений i OS2164, используя искусственное центрирование, и выполнили выборку Монте-Карло (Schellenberger and Palsson, 2009), ограничив такое же количество метаболически активных потоков фотонов через реакции спектрального разложения, соответствующее B и условия R.Затем были оценены различия в масштабированных значениях потока между двумя условиями на основе диапазона возможных значений потока в установившемся состоянии, которые были определены путем случайной выборки («Материалы и методы»). Такие результаты отбора образцов ясно показали, что клетки риса обычно используют одни и те же метаболические пути для фиксации CO ₂ и генерации предшественников биомассы (т. Е. Цикл Кальвина, гликолиз и цикл трикарбоновой кислоты, где все реакции активируются в B, потому что из его более высокой способности генерировать АТФ и / или НАДФН по сравнению с R; дополнительный рис.S7). Эти наблюдения были дополнительно подтверждены моделированием фототрофного роста листьев риса в диапазоне потоков поглощения фотонов. Моделирование анализа потока на основе ограничений показало, что для конкретного притока фотонов количество АТФ и НАДФН, генерируемых фотофосфорилированием и ферредоксин-НАДФ-редуктазой, всегда выше в B, чем в R из-за высокой селективности фотосистем к первому цвету ( подробности см. в дополнительном наборе данных S1; дополнительном рис. S8).Здесь следует отметить, что, хотя такие результаты достаточно хорошо согласуются с данными метаболома, которые показали, что большинство метаболитов присутствуют в больших количествах в B, мы обнаружили, что молекулы сахара в основном подавлены, в отличие от моделирования. полученные результаты. Поэтому, чтобы проанализировать, улучшает ли интеграция данных транскриптома в GEM прогнозирование модели, мы дополнительно ограничили потоки внутренних реакций, используя значения экспрессии генов, используя подход E-Flux (Colijn et al., 2009). Такие дополнительные ограничения четко различали допустимые диапазоны 122 реакций, включая рибулозобисфосфаткарбоксилазу / оксигеназу, ксиланазу, ксилизомеразу, вакуолярную АТФ-синтазу и пируватфосфатдикиназу, значения потока которых различались по соотношению не менее ± 1,5 (для список реакций со значительными различиями в диапазонах потоков см. в дополнительном наборе данных S2). В целом, уникальные результаты выборки подтвердили, что большинство основных метаболических путей, включая цикл Кальвина, гликолиз, цикл трикарбоновых кислот, биосинтез аминокислот и биосинтез жирных кислот, переносят более высокие потоки в B, чем в R, тем самым обеспечивая усиленный биосинтез белки и липиды (рис.6Б). Анализ выборки с ограничением транскриптома также выявил, что потоки в метаболизме крахмала и Suc, а также в путях синтеза клеточной стенки немного подавляются в B, что хорошо согласуется с данными метаболома, которые показали, что уровни углеводов выше в R. В совокупности транскриптом -ограниченный отбор проб потока и данные метаболома показывают, что B имеет немного более высокую способность связывать углерод вместе с высокоактивным катаболизмом, когда фиксированные углеводы быстро метаболизируются в жирные кислоты, аминокислоты и другие вторичные метаболиты.Однако растения, выращенные в R, имеют относительно более высокое содержание углеводов из-за меньшего внутреннего катаболического потока.

ОБСУЖДЕНИЕ

На сегодняшний день было проведено несколько исследований, посвященных восприятию светового сигнала и последующей модуляции различных морфологических процессов растений, включая крупномасштабные эксперименты по профилированию транскриптов у Arabidopsis (Ma et al., 2001) и риса (Jiao et al., 2005). Хотя эти исследования определили свет как ключевой сигнальный компонент, который действительно регулирует экспрессию генов и перестраивает клеточный метаболизм в глобальном масштабе, всестороннее исследование того, какие пути / ферменты / метаболиты / ТФ специфически реагируют на определенное качество света и как они модулируют рост растений а процессы разработки в основном отсутствовали.Таким образом, для выяснения основных механизмов и функций растений риса, выращиваемых при различных световых обработках, мы разработали структуру интегративного анализа, в которой данные омики для конкретных условий и инвариантная метаболическая сеть риса систематически объединяются для получения значимых гипотез.

Это исследование ясно показало, что каждая длина волны в световом спектре управляет различными морфологическими процессами растений: фенотип растения и соответствующая экспрессия генов при различных цветах монохроматического света значительно различаются (рис.2А и 5А). В частности, растения риса, выращенные в группе B, обладают наиболее уникальным фенотипом среди всех других светлых цветов (то есть более короткие растения с более широкими пластинками листьев). Функциональный анализ индивидуальных метаболических путей позволил нам объяснить, что повышающая регуляция метаболизма ABA и понижающая регуляция биосинтеза этилена с помощью B подавляют удлинение ствола (рис. 5B). Здесь следует отметить, что, хотя биосинтез GA, положительного регулятора удлинения гипокотиля, также активируется в B, он может не полностью контролировать рост стебля, а просто модулировать его в присутствии этилена, как сообщалось. ранее (Vandenbussche et al., 2007). Кроме того, сигналы B также вызывают более высокую выработку терпеноидов и фенольных соединений, чем другие световые качества, предполагая, что большая часть фиксированного углерода превращается во вторичные метаболиты (рис. 2B). Для сравнения, грубое подавление нескольких путей, включая фотосинтез, наблюдалось в R, подтверждая, что внутриклеточный метаболизм в W или B более активен, чем в R, как было выявлено в более раннем исследовании, которое показало, что скорость фотосинтеза и азот листьев содержание выше у растений риса, выращенных в режиме B + R, чем в одном только R (Goins et al., 1997). Такие результаты были дополнительно подтверждены интегративным анализом данных транскриптома и метаболома с моделированием в масштабе генома, который показал, что B, в целом, имеет более высокое потребление питательных веществ и катаболические потоки из-за его эффективного метаболизма фотосинтеза и, таким образом, может синтезировать больше аминокислот и жирные кислоты. Основываясь на этих наблюдениях, мы предполагаем, что относительные количества B и R в солнечном свете могут быть важным сигнальным фактором для растений, чтобы модулировать транскрипционный контроль между двумя его конкурирующими задачами: повышением метаболической эффективности и увеличением размера растения (Kleessen et al. ., 2014). Более того, мы предполагаем, что, поскольку солнечный свет имеет максимум B в полдень, а не на рассвете или в сумерках, растения могут использовать его в качестве жизненно важного сигнального компонента для сверхэкспрессии генов фотосинтеза и первичного метаболизма путем подавления экспрессии генов, связанных с ростом, до оптимального уровня. использовать доступные ресурсы (de Montaigu et al., 2010).

Заинтригованные таким точным контролем экспрессии генов растений с помощью отдельных цветов света, мы также проанализировали промоторные области B- и R-регулируемых генов, чтобы обнаружить лежащие в основе механизмы транскрипции, которые, возможно, регулируют их в этих условиях.Примечательно, что интеграция обогащения цис-элементом (таблица I) с данными экспрессии TF (таблица II) предполагает, что большинство B-специфических метаболических генов, вероятно, регулируются транскрипционными модулями, включающими ERF, WRKY, MYB, bHLH, ZnF. , и bZIP TF. Среди этих ТФ мы последовательно идентифицировали некоторые из хорошо известных В-специфических ТФ bZIP, такие как HY5, CPRF5, CPRF6, CPRF7, GBF1 и GBF2 (Jiao et al., 2007), контролирующих различные процессы развития растений, такие как сборка фотосинтетических механизмов, производство фотопигментов и развитие хлоропластов для усиления фотосинтеза (Toledo-Ortiz et al., 2014). Высокое обогащение ABRE-подобных мотивов, связанных с ТФ bZIP и ABI3 в области B, побуждает нас предположить критическую роль ABA в экспрессии светособирающих хлорофилла a / b -связывающих белков (LHCB) (Liu et al., 2013) в дополнение к ингибированию удлинения гипокотилей путем подавления биосинтеза этилена, как обсуждалось ранее. Точно так же идентификация B-зависимых TF ZnF и WRKY в сочетании со значительно более высоким содержанием терпеноидов в B, чем в других цветах, позволила нам предположить, что эти TF могут играть ключевую роль в B-опосредованном синтезе вторичных метаболитов (Suttipanta et al., 2011). Однако высокое обогащение предполагаемых цис-элементов реагирующего на этилен элемента среди активированных генов под R (таблица I) и повышение регуляции соответствующего TF ERF ( Os06g0592500 : этилен-чувствительный коактиватор транскрипции) предполагает, что R-специфический передача сигналов этилена, возможно, важна для удлинения гипокотиля. Взятые вместе, эти определения указывают на положительную регуляцию удлинения гипокотиля фитогормонами, такими как ауксин, этилен и ГА, в сочетании с R, а не с B, который подавляется посредством АБК- и этилен-опосредованных сигнальных путей в последний (рис.7).

Таблица II. Список активированных генов TF с кратным изменением между обработкой B и W Рисунок 7.

Предлагаемая модель регуляции транскрипции риса под B и R. Линии представляют результаты нашего исследования, которые согласуются с результатами предыдущих исследований, а также пунктирные линии — это гипотетические связи, предложенные в этом исследовании, которые необходимо проверить экспериментально. В B биосинтез этилена, стимулятора роста, подавляется АБК, что предотвращает рост стебля.АБК также положительно стимулирует экспрессию LHCB в B. Более того, высокая метаболическая активность наблюдается в нескольких путях, включая биосинтез терпеноидов и фенолов в B. рост и размножение клеток по сравнению с B.

Этот анализ мотивов выявил различные светоспецифичные TF, которые, вероятно, активируются при определенном воздействии света. Однако некоторые из них также могут регулироваться негативным образом с помощью определенных светлых цветов.Одним из таких примеров является обнаружение цис-элементов, соответствующих ТФ PIF1, PIF3, PIF4 и PIF7, среди активированных генов B. PIF представляют собой класс ТФ, который конститутивно экспрессируется и положительно индуцирует несколько процессов скотоморфогенеза и определенных процессов фотоморфогенеза. Под воздействием R PIFs разрушаются за счет прямого взаимодействия с Phys, и, таким образом, эффекты скотоморфогенеза подавляются (Jiao et al., 2007). В этом отношении мы, возможно, обнаружили TF PIF среди генов с повышенной регуляцией B, вызванные отсутствием R, а не индукцией PIF, вызванной B; Таким образом, мы ожидаем экспериментального подтверждения, чтобы подтвердить гипотезу световой специфичности TF.

Как правило, рост и развитие растений интегрируется в зависимости от качества света (длины волны), количества (интенсивности) и фотопериода (продолжительности обработки). Из этих факторов данное исследование в основном отвечает на вопрос о том, как качество света при высокой интенсивности и длительном фотопериоде регулирует морфологические процессы растений через клеточный метаболизм. Это было решено путем интеграции данных транскриптома и метаболома растений риса с GEM, что позволило расшифровать ключевые светоспецифичные сигнатуры регуляции транскрипции метаболической сети риса.Наш систематический подход сделал возможным вывести гипотетическую модель, объясняющую светочувствительные механизмы и регуляцию транскрипции соответствующих метаболических путей в R и B, связанных с наблюдаемыми фенотипами (Рис. 7). Понимание, полученное в результате такого анализа, возможно, может помочь в разработке эффективных закрытых систем выращивания, таких как теплицы или вертикальное домашнее земледелие (Bergstrand and Hultin, 2014; Dong et al., 2014), для выращивания сельскохозяйственных культур (например, риса и пшеницы) и улучшить их агрономические признаки путем модуляции контролируемых светом метаболических путей, что было успешно продемонстрировано у томатов ( Solanum lycopersicum ; Liu et al., 2004). Сходным образом, раскрытие WRKY и ZnF TFs-опосредованного синтеза вторичных метаболитов предоставляет нам правдоподобные мишени для манипуляций, чтобы усилить накопление желаемых метаболитов, тем самым увеличивая питательную способность сельскохозяйственных культур (Luo et al., 2008). Более того, потенциальные B-, R- и обычные светоспецифичные TF, выявленные в этом исследовании, предлагают нам беспрецедентные возможности в развивающейся области оптогенетики; несколько светочувствительных синтетических генных цепей могут быть созданы с использованием таких светоспецифичных TF для контроля экспрессии генов в микробных клетках и клетках млекопитающих.Использование светоспецифических TF в синтетических цепях, особенно в системах млекопитающих, является предпочтительным выбором по множеству причин: точное, пространственно-временное управление и отсутствие потенциальных фармакологических побочных эффектов (Bacchus et al., 2013). Взятые вместе, это исследование представляет собой значительный шаг к характеристике светоспецифичных регуляторных и метаболических ландшафтов у растений путем обращения к подходу системной биологии. В будущем мы полагаем, что предложенная интегративная структура может быть использована для выяснения молекулярных механизмов различных фенотипов растений из различных сред.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Растительные материалы и условия роста

В этом исследовании использовали рис ( Oryza sativa japonica ‘Ilmi’). Поверхность семян стерилизовали, как сообщалось ранее (Jung et al., 2013), и проращивали на чашках с агаром Murashige и Skoog с 2% (мас. / Об.) Suc. Проростки риса культивировали в течение 7 дней в системе LED Chamber System (SJ I&C Co. Ltd.) под одним светодиодом в течение 16 часов фотопериода в день при температуре 25 ° C ± 2 ° C. Растения риса выращивали в светодиодных камерах с 3-Вт светодиодными устройствами (Osram) в пяти различных условиях: B (450 нм), G (530 нм), R (660 нм), W (смесь B, G и R ) и D (без световой обработки).PPF на верхушке растений составлял 94 мкмоль м ⁻² с ⁻¹ при всем освещении, так что скорость флюенса фотонов распределялась по-разному в четырех условиях: условие B с 100% B, условие R с 100% R, условие G со 100% G и условие W с равными количествами каждого из R, G и B.

Для измерения нескольких частей проростков, проростки риса культивировали и удаляли через 7 дней в такое же состояние, как упомянуто выше, и были сделаны их изображения.Длину и ширину частей проростков измеряли с помощью ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/).

Выделение РНК и маркировка зондов

Суммарную РНК экстрагировали из надземных частей растений риса с использованием набора Qiagen RNeasy Plant Mini Prep Kit. Для синтеза двухцепочечных кДНК использовали RevertAid H Minus First-Strand cDNA Synthesis Kit (Fermentas). Вкратце, 1 мкл праймера oligo dT (100 мкм) и 11 мкл (10 мкг) общей РНК объединяли и денатурировали при 70 ° C в течение 5 минут, а затем ренатурировали путем охлаждения смеси на льду.Первую цепь ДНК синтезировали добавлением 4 мкл 5-кратного буфера для первой цепи, 1 мкл ингибитора РНКазы RiboLock, 2 мкл смеси дезоксинуклеотидтрифосфата 10 мМ и 1 мкл фермента обратной трансназы RevertAid H Minus M-MuLV и инкубации при 42 ° C в течение 1 ч. Реакцию останавливали нагреванием при 70 ° C в течение 10 мин. Для синтеза второй цепи, 66,7 мкл воды, свободной от нуклеаз, 5 мкл 10-кратного реакционного буфера для ДНК-полимеразы I (Fermentas), 5 мкл 10-кратного буфера для ДНК-лигазы T4 (Takara), 3 мкл 10 единиц мкл ^{— 1} ДНК-полимерсаза I (Fermentas), 0.К реакционной смеси с первой цепью добавляли 2 мкл 5 мкл ^-1 РНКазы H (Fermentas) и 0,1 мкл 350 единиц мкл ^-1 ДНК-лигазы Т4 (Takara) и проводили реакцию при 15 ° C в течение 2 ч. Смесь двухцепочечной кДНК очищали с использованием набора MinElute Reaction Cleanup Kit (QIAGEN). Для синтеза Cy3-меченных фрагментов целевой ДНК 1 мкг двухцепочечной кДНК смешивали с 30 мл (оптическая плотность 1) праймеров Cy3-9mer (Sigma-Aldrich) и денатурировали нагреванием при 98 ° C в течение 10 мин.Реакцию далее проводили, добавляя 10 мкл смеси 50 × dNTP (10 мм), 8 мкл деионизированной воды и 2 мкл фрагмента Кленова (50 единиц, мл ^-1 ; Takara) и инкубируя при 37 ° C в течение 2 ч. Наконец, ДНК осаждали центрифугированием при 12000 g после добавления 11,5 мкл 5 м NaCl и 110 мкл изопропанола. Осажденные образцы регидратировали 13 мкл воды.

Гибридизация, промывка и сканирование микрочипов

Десять миллиграммов ДНК использовали для гибридизации микрочипов.Собранные образцы смешивали с 19,5 мкл 2-кратного буфера для гибридизации (Roche NimbleGen, Inc.) и доводили до 39 мкл деионизированной водой. Гибридизацию проводили в камере MAUI (Biomicro) при 42 ° C в течение 16-18 часов. После гибридизации микрочип трижды промывали и сушили на центрифуге в течение 1 мин при 500 г . Слайды гибридизированных микрочипов сканировали с использованием предустановки GenePix Scanner 4000B (Axon) с разрешением 5 мкм для сигнала Cy3. Затем отсканированные сигналы оцифровывались и анализировались Nimblescan (Roche NimbleGen, Inc.). Сетка была выровнена по изображению с помощью файла дизайна микросхемы, файла NDF. Выравнивание проверялось путем наложения углов сетки на углы изображений. Это было дополнительно проверено оценками однородности в программе. Анализ проводился в два этапа. Были созданы файлы отчетов о парах (.pair), в которых была собрана информация о последовательности, пробе и интенсивности сигнала для канала Cy3. Вычитание фона на основе данных с использованием локальной оценки фона было выполнено для улучшения оценок кратного изменения на массивах с сигналом с высоким уровнем фона.Данные были нормализованы и обработаны с помощью нормализации кубическим сплайном с использованием квантилей для корректировки колебаний сигнала между чипами (Workman et al., 2002). Обобщение на уровне зондов с помощью Robust Multi-Chip Analysis с использованием алгоритма медианной полировки, реализованного в Nimblescan, использовалось для создания файлов вызовов для повышения чувствительности и воспроизводимости результатов микрочипов (Irizarry et al., 2003).

Измерение содержания каротиноидов

Каротиноиды экстрагировали и измеряли с помощью ВЭЖХ, как описано ранее (Kim et al., 2012а). Вкратце, каротиноиды экстрагировали из образцов риса (0,12 г) путем добавления 3 мл этанола, содержащего 0,1% (мас. / Об.) Аскорбиновой кислоты, перемешивания на вортексе в течение 20 с и помещения в водяную баню при 85 ° C на 5 мин. Каротиноидный экстракт омыляли гидроксидом калия (120 мкл при 80% [мас. / Об.]) На водяной бане при 85 ° C в течение 10 мин. После омыления образцы немедленно помещали на лед и добавляли холодную деионизированную воду (1,5 мл). Для разделения слоев каротиноиды дважды экстрагировали гексаном (1.5 мл) центрифугированием при 1200 г . Аликвоты экстрактов сушили в потоке азота и снова растворяли в смеси дихлорметан: метанол 50:50 (об. / Об.) Перед анализом ВЭЖХ. Затем каротиноиды разделяли на колонке C30 YMC (250 × 4,6 мм, 3 мкм; YMC Co.) с помощью прибора Agilent 1100 HPLC, оборудованного детектором на фотодиодной матрице. Хроматограммы получали при 450 нм. Растворитель A состоял из метанола: воды (92: 8, об. / Об.) С 10 мМ ацетатом аммония; растворитель B состоял из 100% метил трет -бутилового эфира.Градиентное элюирование выполняли при 1 мл мин ^-1 при следующих условиях: 0 мин, 90% A и 10% B; 20 мин, 83% A и 17% B; 29 мин, 75% A и 25% B; 35 мин, 30% А и 70% В; 40 мин, 30% А и 70% В; 42 мин, 25% A и 75% B; 45 мин, 90% А и 10% В; и 55 мин, 90% A и 10% B. Стандарты каротиноидов были приобретены у CaroteNature. Калибровочные кривые были построены для количественной оценки путем нанесения четырех концентраций стандартов каротиноидов.

Измерение общего содержания фенолов

Фенолы из рисового листа экстрагировали ультразвуковым методом (Kim et al., 2006а). Порошкообразные образцы (0,1 г) дважды экстрагировали 80% (об. / Об.) Метанолом (2 мл) ультразвуковой обработкой на водной основе в течение 20 минут, заполненных газообразным азотом, чтобы обеспечить бескислородную среду. Супернатанты собирали центрифугированием при 13000 г в течение 20 минут при 4 ° C и разбавляли до конечного объема 4 мл дистиллированной водой. Неочищенные экстракты фильтровали, используя 0,45 мм политетрафторэтилена. Общее содержание фенолов в экстрактах рисовых листьев определяли спектрофотометрическим методом с использованием фенольного реагента Фолина-Чокальте (Singleton and Rossi, 1965) с некоторыми незначительными модификациями.Разбавленные экстракты (0,2 мл) смешивали с 2,6 мл дистиллированной воды и готовили холостой реагент с использованием 2,8 мл дистиллированной воды. К смесям добавляли реагент Фолин-Чокальтеу (0,2 мл). Через 6 минут добавляли 2 мл 7% раствора Na ₂ CO ₃ , и смеси оставляли на 1 час при 23 ° C. Оптическую плотность считывали относительно подготовленного холостого опыта при 750 нм. Общие концентрации фенолов были выражены в микрограммах эквивалента галловой кислоты в миллиграммах ^-1 рисовых листьев.

Реконструкция метаболической сети

GEM риса «Nipponbare» был реконструирован путем расширения ранее опубликованной центральной модели (Lakshmanan et al., 2013) с использованием последовательности генома (International Rice Genome Sequencing Project, 2005) и информации, собранной из различных источников. биологические и геномные базы данных в установленном порядке. Во-первых, первоначальный проект модели консенсуса был построен путем компиляции аннотированных метаболических генов и соответствующих им биохимических реакций из центральной модели RiceCyc (Dharmawardhana et al., 2013) и KEGG (Канехиса, Гото, 2000). Во-вторых, каждая реакция в проекте сети была скорректирована с учетом направленности реакции на основе информации от BRENDA (Schomburg et al., 2002) и MetaCyc (Caspi et al., 2012), сбалансирована по элементам и заряду и сопоставлена ​​с соответствующими генами для разработки надлежащих Георадарные отношения. Балансировка заряда проводилась для каждой реакции на основе их химической формулы и заряда с использованием соответствующего значения константы диссоциации кислоты для pH 7,2 (http: //www.chemaxon.ru / product / pka.html). В-третьих, каждый путь в проектной сети был вручную выбран с использованием доступных литературных источников для установления присутствия определенных ферментов и связанных реакций в рисе, потому что список, полученный из RiceCyc, содержал несколько реакций от других растений, а также большое количество нерастительных реакций. Реакции, не имевшие достаточных литературных доказательств, были удалены из метаболической сети. Кроме того, несколько специфических для риса реакций, таких как биосинтез оризанола и оризалаэксина, из опубликованных статей, поскольку проект сети не содержал этих путей.Литературные источники снова были использованы для локализации индивидуальных реакций в проекте сети на соответствующие субклеточные компартменты. Если субклеточные локализации определенных реакций недоступны в опубликованных статьях, то для прогнозирования предполагаемого клеточного компартмента использовалось программное обеспечение для прогнозирования локализации Plant-mPLoc (Chou and Shen, 2010). После того, как каждая реакция в черновой сети была отнесена к определенному субклеточному компартменту, были добавлены реакции внутриклеточного транспорта метаболитов на основе доказательств, найденных в литературе и базе данных TransportDB (Ren et al., 2004). Связность черновой сети была затем проверена с использованием алгоритма GapFind для поиска пробелов (Satish Kumar et al., 2007). Выявленные недостающие звенья были заполнены либо добавлением реакций от других растений, чтобы закрыть пробелы в знаниях, либо добавлением реакций поглощения, чтобы обеспечить материальный обмен между клеткой и окружающей средой. Здесь следует отметить, что мы добавляли уникальные реакции во время заполнения промежутка только при наличии достаточных литературных доказательств, подтверждающих присутствие ферментов, или в противном случае промежуток оставался незамкнутым.Кроме того, чтобы подтвердить наличие дополнительных реакций в метаболической сети риса, мы также выполнили поиск по BLASTp в базе данных Национального центра биотехнологической информации для ферментов, добавленных во время заполнения пробелов, с использованием их аминокислотных последовательностей, собранных у различных других организмов, против неизбыточного белка. последовательности генома риса «Nipponbare». Наконец, помимо шагов ручного контроля качества для подключения к сети, заполнение пробелов на основе моделирования также выполнялось с использованием анализа потоков на основе ограничений, добавляя несколько реакций, необходимых для роста in silico.

Анализ дифференциально экспрессируемых генов

Дифференциально экспрессируемые гены между любыми двумя состояниями (т.е. BW, RW, DW и GW) были идентифицированы с использованием пакета limma в вычислительной среде R, который основан на модифицированной статистике t (Wettenhall и Смит, 2004). Впоследствии значения P были скорректированы для проверки нескольких гипотез с использованием метода Бенджамини и Хохберга (1995), и уровень ложных открытий контролировался на уровне 5%.

Идентификация репортерных метаболитов

Репортерные метаболиты в D по сравнению с W, R по сравнению с W и B по сравнению с W были идентифицированы на основании предыдущей публикации (Patil and Nielsen, 2005).Вкратце, каждый метаболит в i OS2164 оценивали на основе значений P соседних дифференциально экспрессируемых ферментов. Для этого каждому ферменту в модели было присвоено значение P на основе дифференциальной экспрессии соответствующих генов. В случае изоферментов или ферментных комплексов использовали самое низкое значение P изофермента или субъединицы фермента. Затем значения P преобразуются в баллы Z для каждого фермента i с использованием обратного нормального кумулятивного распределения следующим образом: после того, как каждый фермент получит баллы Z , тогда баллы Z для каждого метаболита ( Z _{метаболит} ) в i OS2164 был рассчитан с использованием агрегированных баллов Z для k соседних ферментов следующим образом: Баллы метаболита Z скорректированы на фоновое распределение путем вычитания среднего (µ _k ) и деления на sd ( σ _k ) из ​​исходной оценки Z , Z _{метаболит} : наконец, скорректированные оценки Z преобразуются в значения P с использованием нормального кумулятивного распределения и метаболитов со значениями P меньше 0 .05 классифицируются как репортерные метаболиты. В этом исследовании набор инструментов COBRA (Schellenberger et al., 2011) использовался для идентификации репортерных метаболитов из GEM риса.

Обнаружение мотивов и идентификация предполагаемых ТФ

Промоторные последовательности (-1000 и +200 нуклеотидов) относительно экспериментально подтвержденного сайта начала транскрипции для генов с повышенной и пониженной регуляцией, которые являются соседями репортерных метаболитов, были извлечены из нашего исследования. собственная база данных последовательностей промоторов риса.Известные и уникальные промоторные мотивы были обнаружены с помощью программы Dragon Motif Builder (Huang et al., 2005). Каждый раз выявлялось 30 мотивов длиной от 8 до 10 нуклеотидов при пороговом значении 0,875. Мотивы встречаются более чем в 50% последовательностей, а пороговое значение е 10 ^-3 считалось статистически избыточным. Различные классы мотивов были идентифицированы с использованием нескольких баз данных по связыванию ТФ растений, таких как TRANSFAC (Matys et al., 2003) и Osiris (Morris et al., 2008). Общий балл обогащения рассчитывали путем сложения процента встречаемости всех мотивов, принадлежащих к одному семейству TF.

Моделирование метаболических реакций с использованием света

Метаболические реакции с использованием света моделируются в зависимости от длины волны с использованием метода, описанного ранее (Chang et al., 2011) с небольшими модификациями. В этом методе спектр фотосинтетического активного света (т.е. 400–700 нм) был разделен на 15 частей, каждая из которых обозначает кумулятивную область.Например, первая часть, обозначенная 410 нм, охватывает область от 400 до 420 нм, вторая часть, обозначенная 430 нм, охватывает область от 420 до 440 нм и так далее. Такое разбиение активного спектра позволяет нам точно смоделировать эффективный диапазон длин волн фотонов, способных вызвать соответствующую реакцию в рисовой сети. Затем призменные реакции, обозначающие эквивалент содержания фотонов входящего источника света, были реконструированы на основе метода, предложенного в предыдущей публикации (Chang et al., 2011).Он включает в себя оцифровку данных об интенсивности света для каждого источника света и интеграцию под кривой в вышеупомянутых 15 частях фотосинтетического спектра активного света. Такие реакции обозначают распределение доступных фотонов в любой из 15 частей светового спектра. Математически это можно представить следующим образом: где C — коэффициент фотона, доступный в этом конкретном диапазоне, который рассчитывается путем интегрирования общей площади под кривой, как описано ранее (Chang et al., 2011). Призматические реакции входов светодиодов R, G и B моделировались, как описано ранее, с использованием графиков спектральной освещенности производителя. После того, как призматические реакции смоделированы, мы составили проект реакций поглощения фотонов, которые обеспечат фактическую метаболическую реакцию с используемыми фотонами. Для этого мы проанализировали спектр поглощения PSI (Kargul et al., 2003) и PSII (Nield et al., 2000) и использовали графики поглощения. Например, реакция поглощения фотонов при 410 нм для PSI может быть записана следующим образом: где x — это отношение падающих фотонов, поглощаемых PSI на 410 нм.Таким образом мы смоделировали PSI и PSII. Следует отметить, что реакция протохлорофиллид-оксидоредуктазы моделировалась несколько иначе, поскольку для них не было доступно спектров поглощения. Для моделирования протохлорофиллид-оксидоредуктазной реакции мы использовали спектры действия, которые обозначают максимальную активность соответствующего фермента во всем видимом спектре. Соответственно, реакция была записана для всех 15 областей между 400 и 700 нм, и активность на каждом уровне была умножена на всю реакцию, отражая возможные различия в конверсии реакции по длинам волн.

Анализ потоков на основе ограничений

Мы реализовали анализ потоков на основе ограничений для моделирования роста клеток риса в семенах и листьях путем манипулирования ограничениями. Реакция биомассы была максимальной для получения оптимальной скорости роста, как описано в другом месте (Lee et al., 2006; Orth et al., 2010). Математически задача оптимизации (т.е. максимизация биомассы, подверженная стехиометрическим ограничениям и ограничениям емкости) может быть сформулирована следующим образом: где относится к стехиометрическому коэффициенту метаболита i, участвующего в реакции j, обозначает поток или удельную скорость метаболической реакции j и представляет нижний и верхний пределы потока реакции j, соответственно, и Z соответствует клеточной цели как линейная функция всех метаболических реакций, где относительные веса определяются коэффициентом.В этом исследовании задачи анализа потоков на основе ограничений были решены с использованием набора инструментов COBRA (Schellenberger et al., 2011).

Чтобы смоделировать рост клеток риса из семян на Suc или Glc, мы сначала применили регуляторные ограничения к сети, используя логические правила, как описано ранее (Lakshmanan et al., 2013). Данные протеома из базы данных протеомов риса (Komatsu, 2005) также использовались для моделирования функционально активных реакций. Скорость поглощения источника углерода была ограничена экспериментально измеренными значениями (Lakshmanan et al., 2013). Для аэробного моделирования реакция кислородного обмена также была ограничена на уровне 3,312 ммоль г ^-1 DCW d ^-1 на основании литературы (Wen and Zhong, 1995). Чтобы смоделировать рост светодыхаемых клеток листьев риса, аналогичная процедура была проведена с первым ограничением потоков D-реакций до нуля с использованием логических регуляторных правил и протеомных данных. Впоследствии рост клеток листа при отдельных цветах света моделировали путем максимизации биомассы листа при ограничении поглощения фотонов соответствующей длины волны на уровне 100 ммоль г ^-1 DCW h ^-1 .Чтобы смоделировать фотодыхательное поведение при различных соотношениях карбоксилирования и оксигенации ( V _C : V _O ), соотношение потока через Рубиско варьировалось от 1 до 10, как описано ранее (Lakshmanan et al., 2013) . Учитывая большой размер и OS2164, набор реакций, относящихся к метаболизму фолатов, гликолизу / глюконеогенезу, метаболизму азота и метаболизму сульфатов, также был ограничен нулем при моделировании листьев и колеоптилей, чтобы избежать повторного использования свободного кофактора.Полный набор реакций, которые не активируются во время обоих симуляций, перечислены в дополнительном наборе данных S2.

Состав биомассы

Два уравнения биомассы, одно представляет прорастающие клетки семян риса, а другое — фотодыхательные клетки рисовых листьев, используемые в симуляциях анализа потока на основе ограничений, взяты из центральной модели (Lakshmanan et al., 2013) с небольшими изменениями с учетом состава нуклеотидов и жирных кислот.Липидные композиции были получены из предыдущих публикаций (Brown and Beevers, 1987). Общий состав ДНК и РНК также был получен из литературы (Edwards et al., 2012). Индивидуальные веса нуклеотидов в ДНК и РНК были рассчитаны на основании заявленного содержания G + C, равного 69,4% (Goff et al., 2002). Подробную информацию о расчетах состава биомассы можно найти в дополнительном наборе данных S2.

Случайная выборка

Искусственное центрирование методом проб и ошибок Отбор проб методом Монте-Карло (Schellenberger and Palsson, 2009) использовался для однородной выборки пространства раствора метаболического потока рисовых листьев при различных световых обработках с соответствующими ограничениями потока.Во всех обработках PPF 94 мкмоль г ^-1 DCW ч ^-1 был ограничен в каждом из моделирования, и пространство решений было выбрано из 100 000 случайно распределенных точек для 10 000 итераций. Следует отметить, что внутренние реакции были ограничены в каждой моделировании на основе соответствующих данных транскриптома с помощью подхода E-Flux (Colijn et al., 2009). Кроме того, мы также применили нормативные ограничения к сети, используя логические правила, как описано ранее (Lakshmanan et al., 2013) и использовали протеомные данные из базы данных протеомов риса (http://gene64.dna.affrc.go.jp/RPD/) для моделирования функционально активных реакций (для реакций, которые не активируются во время моделирования, см. Дополнительный набор данных. S2). В этом исследовании набор инструментов COBRA (Schellenberger et al., 2011) использовался для реализации выборки случайных потоков.

После отбора образцов метаболической сети при каждой световой обработке величины потоков всех реакций в каждом состоянии сначала нормализовались путем деления значения потока в каждой точке образца на абсолютную сумму всех потоков на основе подхода, предложенного ранее ( Нам и др., 2014). Различия в масштабированных выборках потоков между любой парой условий затем количественно оценивались с использованием подхода Z , как описано ранее (Mo et al., 2009). Сначала были выбраны два случайных вектора потока, по одному из каждой выборки, и кратное изменение рассчитывается следующим образом: Этот подход был повторен 10000 раз для выборки разности потоков, v _{j, fd} , с 10000 точками. Во-вторых, среднее значение выборки µ _j и sd σ _j были вычислены для расчета Z-балла следующим образом: абсолютные баллы Z были затем переведены в значения P с использованием функции нормального кумулятивного распределения, а реакции с P значения меньше 0.05 были классифицированы как статистически различающиеся между двумя проанализированными состояниями.

Дополнительные данные

Доступны следующие дополнительные материалы.

• Дополнительный рисунок S1. Сравнение морфологического фенотипа проростков риса, выращенных при разном освещении и в темноте.

• Дополнительный рисунок S2. Процедура реконструкции и OS2164.

• Дополнительный рисунок S3. Сравнение i OS2164 с предыдущей моделью в масштабе генома риса.

• Дополнительный рисунок S4. PCA экспрессии всех генов, включая неметаболические.

• Дополнительный рисунок S5. Обогащение различных баллов GO: биологический процесс.

• Дополнительный рисунок S6. Визуализация отдельных метаболических путей.

• Дополнительный рисунок S7. Центральная метаболическая карта риса, показывающая кратное изменение метаболических потоков, полученное путем случайной выборки до применения ограничений, основанных на подходе E-Flux.

• Дополнительный рисунок S8. Показатели фотосинтеза листьев риса в цветах B и R.

• Набор дополнительных данных S1. Дополнительный текст, подробно описывающий методы реконструкции GEM, сравнения этой модели с предыдущими моделями риса и результаты фотосинтетических характеристик рисовых листьев в условиях R и B.

• Дополнительный набор данных S2. Файл электронной таблицы, содержащий реконструированный GEM риса, подробную информацию о составе биомассы семян риса и соломы, список ссылок, используемых для реконструкции метаболической сети риса, список возможных новых аннотаций, предлагаемых во время реконструкции, список реакций, неактивированных во время моделирования чтобы избежать бесполезных циклов, и список реакций, которые по-разному выражаются между B и R.

• Дополнительный набор данных S3. Файл электронной таблицы, содержащий список репортерных метаболитов, дифференциально экспрессируемых генов и оценки обогащения мотивов.

• Дополнительный набор данных S4. Системно-биологический языковой файл разметки реконструированного рисового GEM.

• Дополнительный набор данных S5. Сетевая диаграмма высокого разрешения i OS2164 в формате pdf.

Благодарности

Мы благодарим докторов наук.Чун Юэ Морису Чунгу, Сарантосу Кириакополусу и Ин-Чеол Джангу за проницательные комментарии и полезные обсуждения, а также студентам последнего курса проекта Чжаояну Чжану и Джервину Аллигую за помощь в сборке проекта реконструкции и ручном курировании сети соответственно.

Сноски

• www.plantphysiol.org/cgi/doi/10.1104/pp.15.01379

• Автор, ответственный за распространение материалов, составляющих выводы, представленные в этой статье, в соответствии с политикой, описанной в Инструкциях. для авторов (www.plantphysiol.org): Донг-Юп Ли (cheld {at} nus.edu.sg).

• M.L. выполнил моделирование и анализ in silico и написал статью; С.-Х.Л. провел все эксперименты, проанализировал данные и написал статью; Б.М. выполнил анализ TF и ​​отредактировал статью; J.K.K. измерили фенольное содержание и проанализировали данные; С.-Х.Х. координировал все эксперименты, способствовал анализу данных и редактировал статью; Д.-Й.Л. разработал план исследования, координировал проект и отредактировал статью.

• ↵1 Эта работа была поддержана Советом по биомедицинским исследованиям Национального университета Сингапура Агентства по науке, технологиям и исследованиям и Программой нового поколения BioGreen 21 Администрации сельского развития, Республика Корея (Systems and Synthetic Agrobiotech Центр; грант № PJ01109405).

• №2 Эти авторы внесли одинаковый вклад в статью.

• ↵ [ОТКРЫТЬ] Статьи можно смотреть без подписки.

Глоссарий

ABA

по оси абсцисс

AEF

альтернативный поток электронов

B

синий свет

кДНК

комплементарная темная ДНК

CEF

9069 9069 электронный поток 9069 G

зеленый свет

GEM

метаболическая модель в масштабе генома

GO

Генетическая онтология

GPR

реакция ген-белок

IAA

индол-3-уксусная кислота

испускание светодиода

диод

LEF

линейный поток электронов

PPF

фотосинтетический поток фотонов

R

красный свет

TF

фактор транскрипции

W

белый свет

9 сентября 2015 г.

Использование электронных подписей в коммерческих целях в свете пандемии

В прошлом году многим работодателям пришлось изо всех сил пытаться поддерживать работу своих компаний в условиях связанных с пандемией федеральных, государственных и местных законов и руководящих принципов. Тем компаниям, у которых уже была основа технологических процессов, было проще внедрять политики и процедуры удаленной работы. В конце концов, современные технологии позволяют использовать инструменты удаленной связи, чат-боты и виртуальную реальность, и многие задачи сотрудников можно выполнять удаленно.

Одно из технологических достижений последних лет, которое принесло большую пользу удаленным сотрудникам во время пандемии, — это безопасное использование электронных или цифровых подписей (электронных подписей) вместо «мокрых» или личных собственноручных подписей. Несмотря на то, что электронные подписи были жизненно важны для непрерывности бизнеса во многих компаниях перед пандемией, правила социального дистанцирования и удаленной работы позволили быстро отследить потребность в электронных подписях во многих частных организациях. Это верно и для государственных структур.В то время как некоторые правительственные агентства, такие как Управление по охране труда и здоровья (OSHA), разрешили использование электронных подписей в эпоху до COVID, другие также изменили свою политику, по крайней мере, временно. Налоговая служба (IRS), которая в период пандемии принимала электронные подписи на определенных формах, теперь продлила это разрешение до 30 июня 2021 года. Служба гражданства и иммиграции США (USCIS) позволяет работодателям создавать свои собственные электронные формы I. -9, если они следуют требуемым рекомендациям.Даже Министерство труда, согласно Сводке 29 Свода федеральных правил 29 C.F.R. Часть 18 Положения об электронных подписях определяет, что из-за сложности получения «мокрых» собственноручных подписей судьи по административным правонарушениям могут принимать электронные подписи на определенных документах.

Федеральные законы, применимые к электронным подписям

Из-за рисков и требований безопасности требования к использованию форматов электронной или цифровой подписи (электронной подписи) могут различаться в зависимости от цели электронной подписи и применимых федеральных, государственных и местных законов.

Единый закон об электронных транзакциях (UETA) 1999 года был принят почти всеми штатами, за исключением Иллинойса и Нью-Йорка, которые имеют свои собственные законы, касающиеся электронных подписей. Этот закон был призван обеспечить общее единообразие законов штата в отношении хранения записей и электронных подписей и позволил обеспечить правовое обеспечение действительности электронных подписей с возможностью гибкости для штатов в адаптации требований.

Из-за различий в законах штатов, касающихся UETA, в 2000 году был принят Закон об электронных подписях в глобальной и национальной торговле (Закон ESIGN), содержащий руководящие принципы для межгосударственной и внешней торговли, которые выходят за рамки законов UETA и отдельных штатов в отношении электронных подписей.Согласно Википедии, «…. контракт или подпись «не могут быть лишены юридической силы, действительности или исковой силы только потому, что они находятся в электронной форме». Далее в нем говорится: «Термин« электронная подпись »означает электронный звук, символ или процесс, прикрепленный или логически связанный с контрактом или другой записью и выполняемый или принятый лицом с намерением подписать запись». (https://www.govinfo.gov/content/pkg/PLAW-106publ229/html/PLAW-106publ229.htm). Этот закон легализует электронные подписи, что позволяет рассматривать их в качестве доказательств в судебном разбирательстве.

Помимо UETA, различий в законах штата для UETA и Закона о ESIGN, существует также ряд судов, которые оценили законность электронных подписей. Это предполагает, что работодатели должны не только быть в курсе федеральных, государственных и местных законов, касающихся электронных подписей, но и не забывать о разработке прецедентных законов, касающихся UETA в их конкретном штате.

Использование электронных подписей в бизнесе

Есть несколько методов, которые компании могут использовать для электронной подписи.Первоначальный метод заключался в использовании «мокрой» или личной собственноручной подписи с последующим сканированием или фотографированием этого документа для создания электронной записи документа. Этот метод создает проблемы безопасности для поддержания целостности документа. Таким образом, работодатели, решившие использовать этот метод, должны сохранить оригинал документа на случай, если когда-либо потребуется подтверждение подписи.

Для повышения безопасности организации могут использовать цифровые подписи с помощью программного обеспечения или сторонних поставщиков.Любой из них может предоставлять методы аутентификации для проверки подписавшего. Цифровые идентификаторы сертификатов (ID) обеспечивают дополнительный уровень защиты путем аутентификации личности подписавшего с использованием шифрования данных с помощью открытых и закрытых ключей, которые кодируют и декодируют данные. Какая бы система ни использовалась, для того, чтобы электронная подпись имела юридическую силу, существует должно быть: подразумеваемое согласие на использование формата электронного бизнеса;

• намерение подписать, а также возможность отказаться;
• доказательство контекста и обстоятельств подписи, которые могут быть продемонстрированы в ходе аудита;
• связь с конкретным подписываемым документом; и
• действительность записей, которые можно воспроизводить при необходимости.

Рекомендации работодателям

Хотя электронные подписи могут быть эффективными, повышать уровень производительности, оптимизировать процессы и обеспечивать экономию времени и средств на рабочем месте, установка системы электронной подписи без тщательного рассмотрения может поставить под угрозу целостность процесса, в зависимости от системы управления документами. система, возможности удаленной работы и возможности сотрудников, клиентов и / или поставщиков. Работодатели, которые создают или изменяют системы электронной подписи, должны рассмотреть следующие шаги, чтобы обеспечить как действительность, так и исковую силу в процессе и документах.

• Разработайте политику электронной подписи в сотрудничестве с экспертами в области технологий и безопасности, чтобы устранить риски в процессе подписания, шифрования, передачи, печати и хранения документов.
• Определите, какие могут быть допустимые исключения из политики.
• Просмотрите текущие политики хранения записей и при необходимости скорректируйте их, чтобы убедиться в отсутствии конфликтов.
• Определите, какие документы необходимо подписать, а какие нет.
• Обеспечьте согласованные процедуры, такие как получение согласия всех сотрудников, присвоение каждому сотруднику уникального имени пользователя и пароля и требование определенных электронных действий при подписании документа, чтобы оставлять отслеживаемый след каждый раз, когда выполняется электронная подпись.
• Сообщите о предполагаемом использовании новой политики, например какие документы можно подписать в электронном виде, а затем обучить сотрудников процессам. Это хорошее время для работодателей, чтобы четко определить полномочия каждого сотрудника при подписании документов.
• Убедитесь, что соискатели и сотрудники, которые работают удаленно, имеют доступ к Интернету, а также к компьютеру или мобильному устройству для выполнения электронной подписи.
• Подтвердите, что политика и процедуры электронной подписи используются в соответствии с федеральными, государственными и местными законами о дискриминации. Если сотруднику необходимо разумное приспособление в соответствии с Законом об американцах с ограниченными возможностями и Законом о поправках к нему (ADAAA), возможно, потребуется рассмотреть «мокрые» или собственноручные подписи или другие подходы.
• Будьте в курсе федеральных, региональных и местных законов, а также прецедентного права в отношении электронных подписей.

В наш технологический век многие считают, что электронные подписи более безопасны, чем «мокрые» или рукописные подписи. Отмечая простоту и безопасность электронных подписей, а также признавая вероятность того, что удаленная работа для сотрудников и удаленное взаимодействие с клиентами могут стать новой «нормой» и долгосрочной стратегией для работодателей, похоже, что электронных подписей станет еще больше. популярны в ближайшие годы.

Для получения дополнительной информации об использовании электронной подписи на рабочем месте, пожалуйста, свяжитесь с нами по адресу www.newfocushr.com.

Автор: Кэти Уокер, SHRM-SCP, PHR

Старший консультант по персоналу

11.01.2021

IRS принимает больше цифровых подписей в свете COVID-19

IRS принимает декларации по федеральному подоходному налогу с «электронной» подписью в течение некоторого времени, когда подаются декларации по индивидуальному подоходному налогу.Обычно «подпись» представляет собой форму личного идентификационного номера (ПИН), который используется для аутентификации декларации, поданной в электронном виде. Согласно недавнему внутреннему меморандуму, IRS (в ответ на COVID-19) принимает цифровые подписи на некоторых других формах корреспонденции IRS и документов, вступающих в силу немедленно.

Согласно меморандуму, IRS признает, что налогоплательщики и их налоговые специалисты работают из удаленных мест. Аналогичным образом сотрудники IRS работают удаленно, однако работа IRS продолжается.

Изображения подписей налогоплательщика могут быть отсканированы или сфотографированы и помещены в необходимые документы, связанные с определением взыскания налогового обязательства (см. Список ниже). Кроме того, IRS позволяет сотрудникам IRS по рабочим делам принимать электронную почту и передавать документы с помощью безопасных средств.

Налогоплательщик или налоговый специалист должен приложить заявление, которое может быть в форме сопроводительного письма или в теле электронного письма. В заявлении должно быть что-то вроде: «Прилагаемый (название документа) включает действительную подпись (имя налогоплательщика), и налогоплательщик намеревается передать приложенный документ в IRS.«Передача документов в разрешенных целях осуществляется исключительно по усмотрению налогоплательщика.

В настоящее время разрешается подписывать с помощью электронных средств следующие документы:

• Продление срока давности по оценке коллекций,
• Отказ от установленных законом уведомлений о недостатках и согласие на оценку,
• Соглашения о конкретных налоговых ставках или налоговых обязательствах (заключительные соглашения)
• И любое другое заявление формы, требующее подписи налогоплательщика или представителя, обычно собираемое персоналом IRS, работающим вне стандартной процедуры подачи, e.g., доверенность на конкретное дело.

Заместитель комиссара IRS по услугам и правоприменению Сунита Лох заявила, что IRS продолжает отслеживать ситуацию с COVID-19 и анализировать методы, чтобы уменьшить нагрузку на налогоплательщиков и налоговых специалистов. Продолжается рассмотрение стандартов для электронных подписей и других документов, которые могут быть разрешены для получения с помощью электронной подписи.

Кампания по каннабису в Айдахо получает зеленый свет для сбора подписей

Айдахо только что дал согласие группе, надеющейся добавить легализацию медицинского каннабиса в бюллетень для голосования на 2022 год.Те, кто поддерживает Закон штата Айдахо о медицинской марихуане, теперь могут собирать подписи.

Теперь начинается настоящая работа по сбору подписей. Для того, чтобы проголосовать, закон требует подписей 6 процентов голосовавших на предыдущих выборах и шести процентов избирателей из половины округов штата. Всего это будет около 68 тысяч подписей.

Однако, помимо получения такого количества подписей, могут возникнуть проблемы, если эта мера попадет в бюллетень для голосования, поскольку законодательный орган штата по-прежнему в значительной степени консервативен.В настоящее время законодатели Айдахо пытаются протолкнуть закон, который сделал бы неконституционным в штате легализовать все психоактивные вещества, включая медицинский каннабис.

Это не первый случай, когда защитники медицинского каннабиса в Айдахо пытаются добиться внесения избирательных бюллетеней. Они надеялись собрать достаточное количество подписей во время выборов 2020 года, но приказ губернатора не выходить из дома положил этому конец еще до того, как они начались.

«В Айдахо так много людей, которые страдают.И они устали от этого », — сказал Джеки Уинтерс, глава кампании Закона о медицинской марихуане, об этом новом толчке по легализации медицинского каннабиса. «Пора нам переехать. … Это отличное состояние. Мы замечательные люди, и нам просто нужно заботиться о людях, которые имеют значение ».

Потенциальная программа медицинского каннабиса

Если избирательный бюллетень сделает это, а затем будет проголосован за закон, лица старше 21 года с определенными заболеваниями, включая серьезные заболевания, такие как рак или неизлечимая болезнь, могут получить рецепт на до четырех унций каннабиса от лица, осуществляющего уход, после того, как им пропишут у лицензированного врача.

Управление программой будет осуществлять Департамент здравоохранения и социального обеспечения штата, который будет заниматься всеми деталями отрасли, включая лицензирование диспансеров и рост, а также контроль за производством и продажами. Тем, у кого есть ограниченный доступ к диспансерам или финансовые проблемы, будет разрешено выращивать собственный каннабис. Все формы каннабиса будут разрешены, хотя некоторые масла останутся запрещенными.

Закон также гарантирует, что употребление каннабиса во время вождения или выполнения любых других задач, требующих внимания к технике безопасности, по-прежнему является строго незаконным.Не будет употребления каннабиса в государственных школах или в общественном транспорте, а продажа будет законной только при правильных медицинских условиях.

Защитники, поддерживающие этот закон о медицинском каннабисе, должны до 30 апреля 2022 года собрать достаточно подписей. Все подписи должны исходить от зарегистрированных избирателей.

Если мера все же попадет в бюллетень, то только после того, как все подписи будут заверены. После этого будет проведено голосование, и будущее медицинского каннабиса в Айдахо снова будет решено.

Если Айдахо удастся включить легальный каннабис в избирательный бюллетень на 2022 год, есть шанс обойти планы по запрету легализации психоактивных веществ в штате, обеспечивая законный доступ к медицинской каннабису для нуждающихся жителей.

Спектральные признаки флуоресценции и поглощения света для определения сырой нефти, обнаруженной в морской среде | Baszanowska | Журнал Европейского оптического общества

М. Фингас, Основы ликвидации разливов нефти (CRC Press Taylor & Francis Group, Бока-Ратон, 2013 г.).

http://balticseanow.turkuamk.fi/index.php/ the-number-of-oil-spills-down-to-half-in-the-baltic-sea /

К. Д. Геддес и Дж. Р. Лакович (ред.), Обзоры во флуоресценции, 2005 г. (Спрингер, Нью-Йорк, 2005).

Т. Д. Даунаре и О. К. Маллинз, «Видимая и ближняя инфракрасная флуоресценция сырой нефти», Appl. Spectrosc. 49, 754–764 (1995).

М. Фингас и К. Браун, Обзор дистанционных датчиков разлива нефти (Седьмая международная конференция по дистанционному зондированию морской и прибрежной среды, Майами, 20–22 мая 2002 г.).

З. Ван и С. Стаут, Экологическая экспертиза разливов нефти: снятие отпечатков пальцев и идентификация источника (Elsevier, Бостон, 2007).

Н. Скоу, Б. Соренсен и А. Поулсон, «Новый бортовой двухчастотный микроволновый радиометр для картографирования и количественной оценки содержания минеральной нефти на поверхности моря, в материалах Второй тематической конференции по дистанционному зондированию в морской и прибрежной среде, II559. -II565 (ERIM Conferences, Ann Arbor, 1994).

О. Зелински, Я.А. Буш, А. Д. Чембелла, К. Л. Дейли, Дж. Энгельбректссон, А. К. Ханнидес и Х. Шмидт, «Обнаружение морских опасных веществ и организмов: датчики для загрязнителей, токсинов и патогенов», Ocean Sci. 5, 329–349 (2009).

J. Bublitz, A. Christophersen и W. Schade, «Лазерное обнаружение ПАУ и ароматических углеводородов БТКЭ в пробах почвы, загрязненных нефтью», Fresenius J. Anal. Chem. 355, 684–686 (1996).

J. Bublitz и W. Schade, «Многоволновая лазерно-индуцированная флуоресцентная спектроскопия для количественной классификации ароматических углеводородов», Proc.SPIE 2504, 265–277 (1995).

У. Франк, «Обзор метода флуоресцентной спектроскопии для идентификации источника нефтяных разливов», Toxicol. Environ. Chem. Ред. 2, 163–185 (1978).

Пацаева С. Флюоресцентная дистанционная диагностика нефтяных загрязнений: нефть в пленках и нефть, рассеянная в водоеме // EARSeL Adv. Remote Sens. 3, 170–178 (1995).

Л. Порывкина, С. Бабиченко, О. Давыдова, «ГПС-характеристика нефтяного загрязнения в природной воде», в материалах 5-й Международной конференции по дистанционному зондированию морской и прибрежной среды, 520–524 (Michican Tech Research Institute, San Диего, 1998).

Э. Басановска, З. Отремба, «Спектроскопические методы в применении к обнаружению нефтяных загрязнений в море», J. KONES 19, 15–20 (2012).

Доленко Т.А., Фадеев В.В., Гердова И.В., Доленко С.А., Рейтер Р. Флуоресцентная диагностика нефтяного загрязнения прибрежных морских вод с помощью искусственных нейронных сетей // Прикл. Опт. 41, 5155–5166 (2002).

Х. Виссер, «Телеметрическое определение толщины масляных пленок на загрязненной воде на основе свойств флуоресценции нефти», Прил.Опт. 18, 1746–1749 (1979).

E. Baszanowska, O. Zielinski, Z. Otremba, и H. Toczek, «Влияние эмульсий типа« масло в воде »на флуоресцентные свойства, наблюдаемые по спектрам возбуждения-эмиссии», J. Europ. Опт. Soc. Рэп. Публичный. 8, 13069 (2013).

Р. Карпиц, А. Дементьев, З. Куприонис, С. Пакальнис, Р. Вестфаль, Р. Рейтер и В. Гулбинас, «Флюорозиметрический лидар нефтяных разливов для наклонных береговых или морских операций», Прил. Опт. 45, 6620–6625 (2006).

Дж.Василеску, Л. Мармуряну, Э. Карстеа и К. П. Кристеску, «Обнаружение разливов нефти с помощью флуоресцентных лидарных измерений», U. P. B. Sci. Bull., Series A 72, 149–154 (2010).

Аброськин А.Г., Нольде С.Е., Фадеев В.В., Чубаров В.В. Лазерное флуориметрическое определение эмульгированного-растворенного масла в воде // Сов. Phys. Докл. 33, 215–217 (1988).

Э. Басановска, З. Отремба, Х. Точек и П. Роде, «Спектры флуоресценции нефти после ее контакта с водной средой», J.КОНЕС 20, 29–34 (2013).

З. Отремба, Э. Басановска, Х. Точек и П. Роде, «Спектрофлуориметрия в применении к характеристике эмульсий типа« масло в воде », J. KONES 18, 317–321 (2011).

П. Г. Кобл, «Определение характеристик морских и наземных РОВ в морской воде с использованием матричной спектроскопии возбуждения-эмиссии», Mar. Chem. 51, 325–346, (1996).

П. Г. Кобл, «Морская оптическая биогеохимия: химия цвета океана», Хим. Ред. 107, 402–418 (2007).

П. Г. Кобл, «Цветное растворенное органическое вещество в морской воде», в журнале «Подводная оптика и визуализация», Дж. Уотсон и О. Зелински, ред., 98–118 (1-е издание, Woodhead Publishing, Кембридж, 2013).

В. Дроздовска, В. Фреда, Э. Басановска, К. Рудз, М. Дарецки, Й. Хельдт и Х. Точек, «Спектральные свойства природной и загрязненной нефтью морской воды Балтийского моря — результаты измерений и моделирования». Евро. Phys. J. Специальные темы 222, 2157–2170 (2013).

П. Ковальчук, Я.Стон-Эгирт, У. Дж. Купер, Р. Ф. Уайтхед и М. Дж. Дурако, «Характеристика хромофорного растворенного органического вещества (РОВ) в Балтийском море с помощью спектроскопии флуоресцентной матричной флуоресценции с возбуждением и эмиссией», Mar. Chem. 96, 273–292 (2005).

Дж. Х. Кристенсен, А. Б. Хансен, Дж. Мортенсен и О. Андерсен, «Определение характеристик и сопоставление проб масла с использованием флуоресцентной спектроскопии и параллельного факторного анализа», Anal. Chem. 77, 2210–2217 (2005).

Руководство по эксплуатации, Aqualog Horiba, ред.А (Horiba Scientific, 2011).

Р. Н.