Как определить порчу: ‎Как снять сглаз и порчу on Apple Books

Сглаз, порча, проклятие, вампиризм : Как определить негатив…

Балабанова, Т. Н.

Книга даст вам возможность понять, что такое колдовство и как магические действия могут разрушить жизнь любого человека. Вы узнаете, что такое сглаз, порча, проклятие и вампиризм, и как от них избавиться.

Полная информация о книге

• Вид товара:Книги
• Рубрика:Эзотерическая литература, Фэн Шуй
• Целевое назначение:Производств.-практич.изд.,практич.рук-во
• ISBN:978-5-91742-004-2
• Серия:Практическая эзотерика
• Издательство:
  Велигор
• Год издания:2009
• Количество страниц:153
• Тираж:1100
• Формат:60х84/16
• УДК:159.923.2:129
• Штрихкод:9785917420042
• Переплет:обл.
• Сведения об ответственности:Т. Н. Балабанова
• Код товара:851676

Простой способ узнать есть ли на вас порча и сглаз

Порча – это мощное магическое воздействие на человека, под которое, увы, может попасть каждый из нас. Также велика вероятность того, что вас могут сглазить. Последствия этих магических воздействий ужасны. Порча и сглаз могут проявляться различными способами. Если вы вдруг почувствовали, что ваша жизнь меняется в худшую сторону, появились проблемы в работе, семье, с деньгам и со здоровьем, вам стоит задуматься: а вдруг на вас наслали порчу или сглазили? Проверить, есть ли порча или сглаз можно разными способами. Все они заключаются в том, чтобы выявить чужую негативную энергетику, которая влияет на вас и делает с каждым днем все слабее. Давайте рассмотрим самые действенные способы распознавания темного магического вмешательства в вашу жизнь.

Для того, чтобы узнать, есть ли на вас порча, необходимо взять прозрачный стакан с водой и сырое куриное яйцо. Аккуратно разбейте яйцо и вылейте его в стакан. Желток должен быть обязательно целым. После этого опустите голову так, чтобы подбородок касался груди. Стакан приложите на темя и держите его в таком положении примерно минуты три. Старайтесь все это время не двигаться. После этого снимите стакан и внимательно посмотрите, что произошло с яйцом.

Если вода по-прежнему чистая и прозрачная, а желток остался в белке, а белок похож на кучку, то на вас нет никакой порчи. Если желток целый, а белок развалился на несколько частей, которые представляют собой нити, то на вас наложена легкая порча, которая касается вашей семейной жизни.

Если белок распался на несколько нитей, на которых четко прослеживаются пузырьки, то на вас сильная порча, и эта порча наведена профессионалом. В этом случае, вероятнее всего, постарался ваш завистник. Как правило, такая порча имеет ужасны последствия: тяжелые болезни, которые не возможно распознать и диагностировать.

Если на нитях белка или на желтке вы видите не только белые пузырьки, но и черные точки, то это является признаком мощной порчи, которая делалась с использованием кладбищенской земли. Эта порча на смерть. Тот, кто ее наслал идет до победного конца и успокоится только после вашей смерти.

Существует еще один способ определить наличие порчи. Для этого возьмите стакан с водой и три спички. Зажгите спички и дайте им полностью прогореть. Затем киньте их по очереди в воду и понаблюдайте за тем, что будет. Если все спички не тонут, значит порчи и сглаза нет. Если они встали вертикально в воде – это признак того, что в вашу сторону направлен сильный негатив, который, как и порча, может вам навредить. Если все спички упали на дно – на вас наложена сильная порча.

Случается, что из-за одного члена семьи, на которого наслали порчу, страдают все его родственники, живущие с ним под одной крышей. Для того, чтобы узнать, на кого именно наложили проклятье, необходимо в каждой комнате поставить букет зверобоя. В чьей комнате зверобой завянет быстрее всех, тот человек и испорчен.

Проверить наличие порчи поможет еще один старинный способ. После захода Солнца возьмите освященную церковную свечку, зажгите ее и начинайте шепотом читать любую молитву, перекреститесь три раза. Если во время молитвы огонь начинает потрескивать и сильно колебаться, то это явный признак того, что вас сглазили или навели порчу.

Если у вас в доме живет черная кошка, то она сможет выявить у вас наличие порчи. Хорошо, если кошка по характеру ласковая и спокойная. Возьмите ее на руки и начните гладить. Если она покорно сидит, то с вами все в порядке. Если же она ведет себя странно. Вырывается и начинает мяукать – это признак порчи.

Хорошо, если вы сами почувствовали, что с вами что-то не так. Если порча выявлена на ранних стадиях, то ее легче будет снимать. Для того, чтобы снять порчу, необходимо обратиться к профессионалу. Если вы сняли порчу самостоятельно, то вам следует обезопасить себя от повторного магического воздействия. Знайте, что от любого черного проклятья вы сможете защититься!

Источник

Все новости нашего района читайте в  Telegram-канале Агрызские вести

Следите за самым важным и интересным в Telegram-канале Татмедиа

Как определить и снять порчу самому? Практический сеанс самодиагностики и снятия любых видов порчи

Благодарю всех светлых учителей, обучавших меня целительству в течении всей моей жизни

Глава I. Какие бывают виды и признаки порчи?

Много лет, занимаясь профессионально диагностикой и снятием различных видов порч, я разобралась какие бывают виды порч и какие методики лучше использовать для их снятия.

За последние 20 лет не было случая, чтобы я не помогла человеку, пришедшему с просьбой снять порчу.

Что же такое порча? И как понять – есть ли она на Вас или нет?

По моему опыту существует 2 основных вида порчи: 1. бытовая и 2. наведенная.

Бытовая порча – это те ссоры, дрязги, конфликты, которые происходят с нами в повседневной жизни, в быту, в семье, на работе, в транспорте и т. д.

В случае бытовой порчи, тут обычно нет какого-либо специально наведенного магического воздействия. При этом отрицательные эмоции, идущие на нас от обиженного нами человека, могут быть очень интенсивными и могут “пробивать” нашу защитную оболочку, нашу ауру. В результате мы начинаем чахнуть, сохнуть, болеть без видимых на то физических причин.

Тоже самое происходит и в случае с наведенной, магической порчей. Только к ненависти и обиде мага добавляется специально созданная и внедренная в наше поле магическая программа.

Все, кто подвергся действию колдунов, говорят одно и тоже: вроде на физике все в порядке, руки-ноги на месте, анализы все в норме, врачи ничего не находят, а человек плохо себя чувствует, мается, сохнет и дохнет на глазах.

Можно бесконечно спорить существует ли магия или нет. Но, по-моему, лучшая теория – это практика. На практике все, кто пользуются моей методикой самодиагностики и снятия порчи – после проведенной работы по снятию порчи чувствуют себя выздоровевшими, полностью освободившимися от всего, что их тяготило до этого, бодрыми, энергичными, жизнерадостными. Чувствуют легкость и ощущение полета.

Это ли не верный признак, что работа проделана правильно и человек полностью здоров?

Как же понять – есть ли на Вас порча?

Вот типичные признаки бытовой порчи:

– Слабость, вялость, апатия, заторможенность, быстрая утомляемость (причина – пробоины в биополе и утечки биологической энергии)

– Частые смены настроения, постоянные взлеты и падения

– Приступы неконтролируемой агрессии, сменяющейся депрессией и плаксивостью

– Плохой сон, кошмары, трудности с засыпанием

– Резкий набор или снижение веса

– Череда мелких и крупных неприятностей, неудач

– Невезение передается также и на окружающих Вас людей

В случае с наведенной порчей обычно присутствуют также все вышеперечисленные признаки + еще:

– Жжение на лице, ощущение, что “щеки горят”

– Блуждающая боль по всему телу, то внезапно появляющаяся, то также внезапно исчезающая

– Спазмы, скручивания, судороги в теле

– Ощущение присутствия чего-то постороннего, посторонней энергии или сущности в теле

– Ощущение тоски и безысходности, глубокая депрессия, хочется “волком выть”

– Постоянное подташнивание

– Неконтролируемая тяга к спиртному

– Психические расстройства

– Хроническая полоса невезения, такое чувство как будто все вокруг “сговорились” против Вас

Что же делать, если Вы нашли у себя похожие признаки? Не нужно отчаиваться. Выход всегда есть…

За 20 лет практики я разработала методику, которая позволяет снимать любые виды порч – как бытовые, так и наведенные. И дает возможность проводить диагностику и снимать порчи самостоятельно, не прибегая к услугам целителей.

Когда людей, которым нужна помощь по снятию порч в моем окружении стало очень много – я решила написать книгу, в которой подробно описала методику самодиагностики и снятия всех видов порч. Моя методика позволяет успешно снимать не только обычные виды порчи, но и самые сложные и тяжелые виды порч (кладбищенские и с использованием кукл вуду).

В следующих главах Вы найдете подробную практическую методику

Как определить порчу в домашних условиях

Порча, наведенная на человека, может кардинально поменять его жизнь не в лучшую сторону, как будто наступает черная полоса, а в простонародье говорят: «Черная кошка дорогу перебежала». Как узнать порчу? Просто нужно проанализировать ситуацию, события. У человека с наведенной порчей все идет не так, где бы он ни был и что бы ни делал, либо ничего не получаются, либо начинаются проблемы. Не стоить винить обстоятельства, тем более, если это не единичная ситуация, а постоянно повторяющийся негатив, неудачи во всех делах. Болезни, проблемы на работе и в семье – это лишь малая часть последствий наведенной порчи.

Что такое порча и чем она отличается от сглаза?

Порча и сглаз – это абсолютно разные вещи. Сглазить может любой человек, не со зла, не преднамеренно. Это происходит спонтанно: промелькнула доля зависти, невзначай брошено недоброе слово от злости и обиды – и вот человека уже сглазили. Все сразу начинает валиться с рук, появляются проблемы, плохое самочувствие. Но последствия от сглаза более «мягкие», и снять сглаз можно достаточно просто, чего нельзя сказать о порче.

Порча наводится колдуном, для этого нужно обладать магической силой. Она делается не случайно, а преднамеренно, чтобы причинить человеку зло. При наведении порчи задается определенная программа, ее действия и последствия гораздо более сильные и более серьезные, нежели сглаз. Порча может делаться не только на человека, но и на целую семью, жилище и даже животных. Цель порчи может быть самой разной: на болезнь, одиночество, бедность и т. д. Важно то, что порча иногда делается на целые поколения и тянется веками – передается по наследству. Иногда причины неудач можно найти в далеком прошлом, у предков, которым по тем или иным причинам была наведена порча.

Как определить порчу в домашних условиях?

В первую очередь, это видно по самому человека. Меняется его поведение, здоровье, взаимоотношения с родными, друзьями, коллегами. Жизнь перестает приносить радость. Человека с наведенной порчей можно увидеть невооруженным взглядом. Им овладевает полный спектр негативных чувств: раздражение, злость, приступы отчаяния, страх. Человек все больше погружается в себя, страдает от бессонницы, мучают кошмары. Он истощается психологически и физически, в результате возникают болезни. Человека как будто подменили, он перестает видеть жизнь в прежних красках.

Существуют и другие способы, как узнать порчу в домашних условиях. Сделать это достаточно просто, с этим справится любой человек. Чтобы все было объективно, рекомендуется использовать разные способы, как определить порчу. Запаситесь спичками, церковной свечей, золотым кольцом.

Как узнать порчу в домашних условиях легко и просто?

Купите церковную свечу, зажгите ее и просто поводите перед собой некоторое время. Наблюдайте за поведением свечи. О порче свидетельствует сильное копчение, трещание. Пламя свечи начинает трепетать. Прочитайте молитву «Отче наш» и обратитесь к специалисту для снятия порчи.

В определении порчи поможет обычное золотое кольцо. Предварительно хорошо умойте лицо, просушите его. И не нанося никаких косметических средств, проведите кольцом по щеке. Оставшийся темный след будет говорить о наличии порчи.

Еще один простой способ – с помощью спичек. Наполните стакан водой, зажгите три спички. И когда они немного прогорят, бросайте их в стакан. Спички плавают на верху – порчи нет. Если они утонули или плавают вертикально – на человеке порча. Существуют и другие способы, как определить порчу в домашних условиях. Названные варианты являются самыми простыми, распространенными и достоверными.

ПРИЗНАКИ, КОТОРЫЕ ГОВОРЯТ, ЧТО НА ЖЕНЩИНУ НАВЕЛИ ПОРЧУ

Некоторые люди не могут спокойно наблюдать за победами окружающих, поэтому стараются сделать все, чтобы навредить более успешному человеку. Если в последнее время вас настигла полоса неудач, возможно, вы стали жертвой порчи, от которой следует избавиться немедленно.

Красота, деньги, успехи на работе и в личной жизни — все это может стать причиной зависти. Как выяснилось, женщины намного чаще, чем мужчины, становятся жертвами негативных программ, воздействие которых может отразиться на их здоровье и жизни в целом. Определить наличие порчи моментально почти невозможно, ведь по ощущениям она напоминает обычную болезнь или легкий недуг. Впоследствии ее влияние может быть настолько сильным, что это приведет к пагубным последствиям. Эксперты сайта dailyhoro.ru расскажут вам, как определить порчу и избавиться от нее в кратчайшие сроки.

Как определить порчу

Чтобы снять порчу, для начала необходимо определить ее наличие, которое выражается сразу в нескольких признаках. Ухудшение самочувствия, негативные перемены в жизни и неудачи являются основными показателями того, что вы находитесь под воздействием негативной программы.

Если в последнее время вы сильно устаете без причины — это первый признак того, что на вас наложена порча. Причем такая усталость отличается от той, которую вы испытываете после тяжелого трудового дня. В большинстве случаев она сопровождается сильной мигренью, болями в костях и суставах и плохим настроением.

Второй признак порчи — нарушение сна. Иногда причинами бессонницы могут быть переживания, проблемы или другие физиологические изменения в организме, но не исключено, что она может возникнуть из-за порчи. В этом случае ее отличительной чертой являются ночные кошмары, похожие на реальность. Если в последнее время вам постоянно снится один и тот же человек, значит, именно он навел на вас порчу.

Иногда даже обычная простуда может перерасти в серьезное заболевание, и произойти это может из-за наличия порчи. Если не снять негативную программу вовремя, то ваше состояние начнет ухудшаться с каждым днем.

Женщина может ощущать дискомфорт в области глаз, что впоследствии грозит ухудшением зрения.

Если порча начинает прогрессировать, у женщины могут возникнуть пристрастия к вредным привычками, даже если раньше они отсутствовали. К основным признакам относится злоупотребление алкоголем и психотропными веществами, которые наряду с порчей начинают разрушать организм женщины в несколько раз быстрее.

Негативная энергия может отразиться на репродуктивном здоровье женщины, что может привести к проблемам с зачатием или бесплодию.

Существует мнение, что, посетив церковь, можно определить наличие негативной программы. Находясь в церкви, женщина будет испытывать дискомфорт и желание как можно скорее покинуть священное место. Если вы подозреваете, что кто-то из ваших близких стал жертвой порчи, установите около изголовья кровати зажженную церковную свечу. Если пламя будет неспокойным, значит человек находится под воздействием сглаза или порчи.

Иногда даже самые близкие подруги могут позавидовать вашей привлекательности. В этом случае порча будет буквально «съедать» красоту женщины. Чаще всего это проявляется в резком увеличении веса, а также в проблемах с кожей и волосами. Кроме того, вы будете испытывать неутолимое чувство голода и недовольство собственной внешностью, из-за чего могут возникнуть психологические расстройства.

Даже если раньше вы пользовались популярностью среди противоположного пола, то во время воздействия порчи мужчины перестанут обращать на вас внимание.

Под воздействием порчи женщина может начать вести себя неестественно. Если раньше она была верной женой, после негативного воздействия она может изменять супругу, что приводит к проблемам в личной жизни.

Если вы стали слышать посторонние звуки и голоса умерших родственников, возможно, они пытаются предупредить вас о наличии негативной программы.

Как снять порчу с помощью ритуала

Если вы хотите избавиться от негативной программы, воспользуйтесь эффективным и проверенным ритуалом.

Для проведения ритуала понадобится:

• красная церковная свеча;
• ваша фотография;
• золотая цепочка;
• черная ткань;
• неглубокая миска.

За несколько минут до полуночи зажгите свечу и положите перед собой фотографию. Желательно, чтобы помимо вас на ней не было изображено других людей. После этого поднесите фотографию к пламени и сожгите ее. Пепел необходимо аккуратно сложить в миску. Затем дождитесь, когда догорит свеча, а после этого перемешайте оставшийся воск с пеплом. Сформируйте и полученной смеси куклу и на уровне талии обмотайте ее золотой цепочкой. Сожмите ее в руках и произнесите:

«Призываю я, (имя), все сверхъестественные силы и прошу вас избавить меня от порчи. Пусть золотой пояс впитает в себя негатив и облегчит мучения мои, посланные мне злыми людьми. Услышьте просьбы мои».

Произнесите заговор три раза, а затем поцелуйте куклу. После этого заверните ее в черную ткань и закопайте возле кладбища. Если ритуал подействовал, то уже на следующий день вы почувствуете себя лучше.

Иногда каждому из нас необходимо поразмыслить над своей жизнью и побыть в одиночестве. Иногда человек пребывает в таком состоянии слишком долго, и виной тому может быть негативная программа.

Как узнать порчу и как ее снять самостоятельно

Симптомы

Теперь поговорим о конкретном диагнозе. Не ругайтесь и будьте терпеливы. Сами увидите, что нельзя назвать несколько конкретных симптомов подобного негативного воздействия. Оно слишком многофакторное, изворотливое, хитрое

Выясняя, как определить порчу, сосредотачивайтесь на том, что важно лично для вас. То есть негатив проявляется в «самом тонком» месте

И именно в той сфере жизни, которая для человека наиболее чувствительна. Если стараться «подогнать» свои симптомы под определенные параметры, то можно запутаться, принимая второстепенное за основное. А если использовать критерий важности, то будет понятнее

Анализируя события, обратите внимание на момент наступления негативных перемен. Если его можно четко обозначить, порча, скорее всего, есть

Хотя, далеко не всегда она начинает действовать стремительно, резко ввергая жертву в полосу бед и несчастий. Однако границу все равно можно почувствовать или вспомнить. Кроме того, когда думаете, как определить порчу у себя или близкого человека, концентрируйтесь на самочувствии. Организм в данном случае выступает вашим союзником. Он обязательно подскажет, есть ли негатив в ауре.

Признаки сглаза

Почти все люди интересуются: как самостоятельно выяснить есть ли на мне порча либо сглаз? Обычно таковым вопросцем начинают интересоваться при неожиданном упадке сил, возобновлении вылеченных болезней либо при неизменном невезении. Если упадок сил нереально разъяснить сезонной нехваткой витаминов, стоит провести диагностику на наличие негативной энергии в поле человека.

Если в один момент возникают вылеченные заболевания либо без предпосылки поднимается температура, следует немедля узнать, в котором состоянии находится энергетика. Нескончаемая чреда неудач не может считаться обычным явлением: это постоянно свидетельствует о внедрении чужеродных энергий в био поле человека.

Обыкновенные способы диагностики сглаза

При помощи темного хлеба можно выявить наличие сглаза на человеке. С вечера поставьте стакан с водой в комнату рядом с собой. Днем возьмите в правую руку кусок темного хлеба и держите в руке несколько минут. В это время недозволено концентрировать мысли на обряде, лучше отстраниться от всего. Положите кусок в стакан: если он пойдет ко дну через минутку, вас сглазили. Если длительно плавает на поверхности, энергетика в порядке.

Таковой же ритуал можно провести со спичкой. Подожгите спичку и держите ее, пока не сгорит больше половины. Потом бросьте спичку в стакан с водой. Если утопнет через минутку, вас сглазили. Если длительно держится на поверхности, сглаза нет.

Просто проверить сглаз по идолам и амулетам. Если у вас есть защитный амулет, при атаке чужеродной энергетики он деформируется: треснет, потемнеет, поломается либо потеряется. Колдуны рекомендуют всем иметь обережные предметы по защите от случайной либо направленной энергии.

Выявление сглаза угольком

Три уголька (либо стопроцентно сожженных спички) посодействуют выявить сглаз на человеке. Если все угольки утопли, на человеке есть сглаз. Негатив можно сходу же снять, если умыть лицо хворого данной водой и напоить.

Перед ритуалом следует перекрестить стакан с водой и себя, произнеся: «Господи, помилуй». Когда опустите угольки, скажите:

Угольки могут утопнуть по двум причинам: из-за заболевания человека и из-за сглаза. Но если человек не сглажен, он не отреагирует на ритуал. Если же хворого сглазили, опосля утопления угольков он будет зевать, потягиваться либо испытает приступ тошноты. Тогда следует прочесть на воду особый комплот и умыть хворого, также отдать выпить из стакана.

Диагностика камнями

Как определить сглаз и порча при помощи обыденных камешков? Для этого нужно подержать 3 камушка в руках. Камешки поглотят в себя информацию о ауре человека и дадут символ. Застелите стол незапятанной скатертью (это нужно сделать, даже если у вас на столе никогда не лежит скатерть), поставьте емкость с водой и опускайте камешки по очереди. При всем этом следует гласить так:

Если зашумит в воде 1-ый гранит, означает, вы прогневали бога — вините лишь себя в наказании. Если зашумит 2-ой гранит, вас сглазил случайный человек. 3-ий гранит скажет о человеке из близкого окружения, который вас завидует и в тайне хочет зла.

Что созодать, если какой-либо гранит зашумел в воде? Необходимо выйти на улицу и вылить воду с камнями в левую сторону от себя. При всем этом следует сказать такие слова:

Очищение дома от негатива

После того, как вы определили, что на дом или квартиру была наведена порча или сглаз, вы можете приступить к очистке жилья от колдовства. Для этого существует много ритуалов и обрядов, но я расскажу, какие в своей практике использую я.

Как очистить дом от негатива и порчи с помощью соли

В своей практике я неоднократно использовала обряды с солью. Они очень действенны и не требуют больших усилий. Вам предлагаю два варианта того, как можно использовать соль, чтобы очистить дом от порчи, сглаза и прочего негатива.

Вариант №1. Возьмите обычную поваренную соль, иглы (булавки). По количеству иголок должно быть ровно столько, сколько человек в вашей семье.

Высыпьте соль с иглами на сковороду и нагрейте все это на маленьков или среднем огне. Перемешивайте содержимое сковороды по часовой стрелке, озвучивая, что именно вам не нравиться в вашем доме. Когда соль изменит свой цвет, снимите сковороду с огня и повернитесь спиной к плите. Теперь пройдите по дому с разогретой солью. Выбирайте маршрут, который совпадает ходу часовой стрелки. Обойдите каждый уголок своего жилища.

Когда закончите круг, вернитесь к плите и снова разогрейте содержимое сковородки. При этом соль с иглами следует перемешивать движениями, которые напоминают крест. Сопровождайте это действие словами:

Теперь соль, иглы можно смыть в унитаз, а сковороду тщательно отмыть со всевозможными чистящими средствами.

Вариант №2. Возьмите самую обычную соль, которую только найдете в доме и насыпьте небольшими щепотками во всех углах своего жилья. Будет лучше, если соль насыпать не просто на пол, а на холщенную материю — это усилит действие обряда и поможет быстро и аккуратно собрать соль в нужное время.

Когда во всех уголки дома, даже в самых труднодоступных, расположены “подклады” с солью, следует сказать следующие слова:

Оставьте все как есть на три дня. По прошествии этого срока, соберите всю соль и вынесите ее на перекресток подальше от дома.

Этот обряд нужно будет повторить еще два раза с перерывом на 9 дней.

Как молитвой очистить дом от порчи, сглаза и прочего негатива

Своим клиентам, которые приходят с вопросом: “Как очистить дом от порчи и сглаза?” я советую самый простой способ — это раз в месяц проводить ревизию всей домашней утвари (начиная от десертных ложек и заканчивая новогодними костюмами). Далее следует все старое, поломанное, треснувшее выбросить.

Завершить все это нужно генеральной уборкой, во время который очищается от хлама, пыли и мусора самые дальние уголки жилья. А во время этого процесса следует читать про себя молитву “Отче наш”.

Многие скептически относятся к такому совету. Но, уже после первой ревизии они приносят огромное количество подозрительных предметов для определения подклада. И знаете, что в итоге? Над всеми этими вещами я провожу ритуал, который разрушает силу подклада и жизнь в семьях налаживается.

Если такой способ очистить дом от порчи вам кажется очень трудозатратным, то можете воспользоваться следующим вариантом.

Молитва Николаю Чудотворцу от наведенной на дом порчи

Купите в церкви икону Николая Чудотворца и несколько свечей (хотя бы три). Дома зажгите свечи, возьмите икону святого и обойдите с ними все помещения в доме.

Когда марш по дому закончен, поставьте икону Николая Чудотворца на стол, рядом установите горящие свечи и прочтите молитву:

Свечи оставьте догорать. Тем временем пройдитесь еще раз по дому и окропите все комнаты, все труднодоступные места святой водой.

Признаки порчи

Порча — это страшная негативная программка, которая разрушает биополе человека и может привести к суровой заболевания либо погибели. Порчу нужно снимать, чтоб освободить хворого от тяжеленной участи. Порча никогда не уйдет сама, задачка данной волшебной программки — уничтожать человека. Как выяснить если на для тебя порча либо сглаз и что созодать?

О порче можно гласить, если:

• человек отрешается носить нательный крестик — он ему стал неприятен;
• человек не выносит церковную атмосферу, хотя ранее с наслаждением посещал храм;
• человек не может глядеть в свои зрачки в зеркале — не выносит собственного взора;
• женщина либо юный человек не могут отыскать свою вторую половинку — дела не складываются;
• человек худеет денек ото денька при обычном питании;
• человек быстро набирает вес при малом количестве еды в денек;
• вы нашли под дверью странноватые предметы, воду либо землю;
• заздравные свечки в церкви не загораются либо сходу тухнут — это порча на погибель.

Так же признаками порчи являются последующие отличия:

• бессонница и кошмары;
• каждодневные приступы мигрени;
• чувство безысходности и ужаса;
• нашествие в дом мышей, тараканов либо муравьев;
• отсутствие желания что-то созодать, неизменный упадок сил;
• человек ощущает себя нездоровым, а диагнозы в больнице обычные.

Также признаком порчи является противные чувства в позвоночнике, в особенности, в области лопаток. Это гласит о том, что порча начала свое разрушительное действие.

Определение порчи церковной свечой

Как определить порчу либо сглаз? Есть несколько методов выявления негативных действий при помощи церковной свечи. Самым обычным способом является медитация на свечу. Поставьте в канделябр свечу, стол застелите незапятанной скатертью либо положите отрез белоснежной ткани. Установите свечу на расстоянии 25-30 см от себя и смотрите на пламя.

• Если пламя свечки незапятнанное, пылает ровно — на человеке нет негативных программ.
• Если пламя ровненькое, но мерклое — аура поражена сглазом.
• Если пламя ровненькое, но поднимается высоко, а свеча трещит и воск отекает запятанными каплями — порча есть, но пока себя не проявляет.
• Если свеча коптит, порча внедрилась в ауру и начала разрушать человека.

Можно определить наличие порчи на человеке по фото. Для диагностики подходящ недавнешний снимок, где человек изображен один. На фото руки/ноги не должны быть скрещены — это нарушает поток энергии в теле. Крестите изображение слева вправо и читайте «Отче наш». Наблюдайте за поведением свечки: признаки порчи описаны выше.

Способ с темной тканью

Как определить порчу и сглаз самостоятельно? Для диагностики нужно взять темный платок без орнаментов либо отрез темной ткани. Человек должен сесть на стул с прямой спиной, на голову необходимо набросить материал. Иной человек зажигает церковную свечку, держит ее в правой руке и читает «Отче наш» 9 раз. Если диагностируемому станет плохо, означает, порча есть.

Способ с золотым кольцом

Умойте лицо с мылом, чтоб не оставались следы косметики. Проведите обручальным кольцом по щекам. Если на коже остался черный след, порча есть.

Способ с яичком

Как определить — сглаз и порча — при помощи яичка? Необходимо налить в граненый стакан чистую воду, накрыть тканью и поставить в черное пространство часа на 3-4. Дальше следует аккуратненько разбить в воду сырое яичко и водить стаканом над теменем, читая «Отче наш». Движение руки — на право, по часовой стрелке. Потом поглядите на содержимое стакана: если от яичка потянутся белоснежные нити ввысь, означает, порча есть.

Еще несколько методов определить и снять проклятие смотрите в видео:

Поделиться :

Как выполнять защитный обряд?

Диагностику порчи воском можно выполнить в любой день, кроме воскресенья и церковных праздников.

Женщинам отливку воском рекомендуется выполнять в женские дни – среду, пятницу и субботу. Мужчинам проведение ритуала рекомендуется во вторник и четверг.

Прежде чем приступить к снятию порчи пчелиным воском, нужно подготовить емкость с чистой колодезной водой, примерно 200 граммов пчелиного воска, металлическую кружку и небольшой тазик. Чтобы ритуал оказался эффективным, необходимо отказаться от применения водопроводной воды.

Воду для ритуала всегда набирают перед самым рассветом. Если вода берется из колодезя, то ее черпают по направлению с запада на восток. Если для ритуала будет использоваться речная вода, то ее набирают против течения. Во время забора живой воды нужно читать заговор:

По возвращению домой у человека может возникнуть сильное желание обернуться и посмотреть назад. С этим желанием нужно бороться, иначе обряд окажется безрезультатным. На пути домой нельзя вступать в беседу с прохожими.

Обряд отливания нужно осуществлять после захода солнца. Сперва нужно вылить набранную воду в широкий таз и положить в емкость серебряный предмет, который поможет обеззаразить воду.

Металлическую кружку тем временем ставят на слабый огонь и сразу же кладут в нее подготовленный воск. Когда материал нагреется, можно будет увидеть, что он образовал фигуру. Эта фигура поможет выяснить наличие порчи на человеке. Чтобы расшифровать фигуру, нужно подключить свое воображение.

О наличии порчи на человеке свидетельствуют такие фигуры:

• остроугольные фигуры;
• столбики;
• петли;
• шишки.

Считается, что наличие таких фигур свидетельствует о том, что порча перешла к человеку от кровных родственников. Порча может быть сделана на здоровье, личную жизнь, финансы и везение. Описанный выше метод использования воска позволяет выяснить, есть ли на человеке порча или нет. Если негативное воздействие присутствует, необходимо снять порчу воском.

Как снять порчу:

1. Для проведения ритуала снятия порчи нужно взять чашку, ковш, прихватку, полотенце и металлическую кружку. Если ритуал будет организовываться без присутствия человека, нуждающемуся в очистке от порчи, то нужно подготовить фото любого формата, на котором изображен человек. Также понадобятся церковные свечи и православные иконы.
2. Емкость для отливки наполняют водой, а до этого ставят ее на фотографию человека, если он отсутствует на обряде. Тем временем воск плавят в металлической кружке на медленном огне. Ковш с водой тем временем располагают над головой человека. Расплавленный воск затем медленно выливают в воду, читая этот заговор.
3. После этого действия нужно внимательно рассмотреть получившуюся восковую фигурку и расшифровать ее.

Расшифровки:

• если воск запузырился, то это указывает на то, что человек страдает от нервных потрясений;
• если столбик направляется вниз, то на человеке есть сильная порча;
• если столбики «обросли» ответвлениями, то речь идет о порче, сделанной на кладбище;
• шишки на воске свидетельствуют о том, что человек подвергся негативному влиянию ненависти окружающих;
• если на воске образовались волны с выпуклостями, то это указывает на то, что человек пострадал от испуга;
• если на воске можно рассмотреть петлю, получившуюся в форме эмбриона, то человек подвергся порче еще до своего появления на свет;
• кольцо на воске указывает на то, что порча сделана на работу и материальный достаток;
• фигура, напоминающая мужской половой орган, свидетельствует о том, что на человека был сделан приворот;
• изображение женских половых органов на воске означает порчу на здоровье.

О порче на смерть свидетельствует фигурка, напоминающая гроб и крест. Появление на воске розы говорит о том, что кто-то позавидовал счастливой личной жизни человека и мечтает ее разрушить.

Эзотерики, практикующие отливание воском, рекомендуют выполнять обряд несколько раз. За первую отливку можно почистить от порчи мозг и мысли. Вторая отливка называется сердечной, а третья помогает очистить от негативного влияния половую сферу.

После выполнения обряда по снятию порчи воском нужно избавится от воды. Для этого нужно взять емкость с жидкостью, найти безлюдное место и вылить воду, прочитав такой заговор

Восковую фигуру после выполнения обряда сжигают и закопать огарки в землю, читая при этом православную молитву «Отче наш».

• Снимаем порчу солью;
• Список лучших заговоров на снятие порчи;
• Православные молитвы от порчи и сглаза — https://magjournal.info/porcha-i-sglaz/pravoslavnye-molitvy-ot-proklyatij/.

Что делать для очистки

Перейдем к конкретным обрядам. Самым распатроненным считается отчитка молитвой. Проводить ее следует с помощником. Необходимо сходить в храм и купить свечи. Еще приобретите там молитвослов. Это полезная книжица для волшебника. В помощники позовите любящего человека. Желательно, чтобы он разделял ваши убеждения и взгляды. Если эта личность будет сомневаться в действенности ритуала, то он пойдет насмарку, только время зря потратите.

А проводится чистка следующим образом:

1. Жертву порчи поставьте в центре комнаты (можно сесть, если человек себя дурно чувствует).
2. Помощник должен взять в руки зажженную свечу.
3. Нужно медленно водить огоньком вдоль тела, читая молитвы.
4. Тексты на самом деле не имеют значения. Как правило, используют «Отче наш», 90 и 91 псалмы, «Да воскреснет Бог», «Богородице» (последняя, если отчитываю женщину).
5. Следует внимательно смотреть на свечу. Она станет чадить, столкнувшись с негативной энергетикой. В этом месте крестят семь раз жертву, читая столько же молитв.
6. Если порча сильная, то работать придется долго. Одна свеча сгорит, зажигайте следующую и так далее.
7. Ритуал повторяют трижды с периодом в 24 часа.

Что происходит с человеком во время и после снятия порчи, что он чувствует, когда выходит порча?

Сначала давайте немного поговорим о том, какие симптомы могут свидетельствовать о наличие сглаза на человеке.

• Как уже упоминалось ранее, порча может проявляться абсолютно по-разному, в зависимости от того, на что она сделана. Но есть несколько общих признаков, которые сигнализируют о том, что кто-то воздействует на вас.
• Итак, наиболее частым симптомом есть нарушение сна. Это может проявляться как бессонница или же, как постоянные ночные кошмары.
• Появление нервозности и тревоги. Человек становится неуравновешенным, везде чувствует опасность для себя, появляются признаки апатии.
• Резкое ухудшение здоровья человека. Как правило, никаких видимых причин для этого нет, недуг появляется внезапно, и доставляет огромное количество неприятностей. При этом врачи могут уверять, что состояние здоровья вполне удовлетворительное и никакого лечения не требуется.
• Постоянное чувство тяжести. Ощущение, как физической тяжести, так и моральной.

Наведение порчи

Во время порчи человек чувствует себя морально подавленным, всякий интерес к жизни неумолимо угасает.

• Многие отмечают, что находятся в таком состоянии, что просто не хочется жить, руки опускаются, а все, что раньше приносило удовольствие и счастье, попросту перестает интересовать.
• Также во время порчи у людей могут появляться различные галлюцинации, как звуковые, так и зрительные. Человек может слышать голоса, видеть непонятные силуэты.
• Бывает такое, что во время сглаза, человек как будто исчезает на глазах. За несколько недель может уйти два-три килограмма, а то и десяток. Или же наоборот – человек стремительно набирает вес, но при этом рацион его питания, режим дня остается прежним.
• Могут появляться различные фобии. К примеру, человек, который ранее безумно любил собак вдруг резко начинает их избегать и бояться.

Ощущения человека после наведенной порчи

Что же происходит после снятия сглаза и как чувствует себя человек, на котором эта порча была? Этот вопрос весьма интересный и непростой.

• Во-первых, нужно отметить, что самочувствие человека после процедуры снятия негатива быть хорошим в принципе не может. Это происходит по причине того, что после проведения ритуала порча какое-то время еще «выходит».
• Первое, что чувствует человек, это усталость, подавленность, сильные головные боли и даже головокружения.
• Также отмечают, что во время того самого «выхода» порчи может появиться желание плакать. Это вполне безопасно для вашего здоровья, просто так ваш организм избавляется от всего негатива.
• В более редких случаях отмечают появление расстройства желудка и рвоты, а также повышение температуры. Все это вполне нормально для такого явления, потому как негатив, который скопился в вашем теле, должен оттуда выйти и происходить это может с помощью той же диареи или рвоты.
• Еще одним последствием сглаза может стать сыпь по всему телу или же появление аллергии. Лечение будет таким же, как и всегда.
• Также нужно отметить, что если на человеке была достаточно сильная порча, которую навели в принципе просто из-за каких-то разногласий, то есть весомой причины для этого негативного действия не было, она может выходить сильным зудом глаз. Как правило, такая порча может наводиться вследствие человеческой мелочности, алчности и зависти.
• Уже после того как вся порча «выйдет» человек перестает постоянно болеть, дурные мысли посещают его все реже, злоба, ненависть и зависть больше не имеют над ним никакой власти.

Как видим, приятного в ощущениях после снятия порчи очень мало, но это необходимо для того, что бы по истечении времени все вернулось на круги своя.

Какие бывают, и кто их может снять с человека?

Существуют разные виды порчи, и каждая влияет на человека по-разному. Ниже мы опишем самые главные разновидности порчи.

На смерть

Это самая мощная и опасная программа, направленная на уничтожение человека физически. Ее признаком является неожиданное ухудшение здоровья и невозможность установить диагноз. Пораженный человек заболевает не только физически, но и душевно: он теряет и душевные силы, и желание бороться. Нередко человек спивается, превращается в наркомана или кончает жизнь самоубийством.

Черные маги используют для такой работы биологические частицы, принадлежащие объекту – слюну, пот, кровь, волосы, сперму. Практически всегда используется и фотография.

На одиночество

Сюда относятся:

• вековуха (обрекающая женщину на вечную девственность),
• венец безбрачия,
• саван на одиночество.

Человек, на которого наложена такая порча, может иметь привлекательную внешность, влюблять и ходить на свидания, но построить семью, даже простую пару, получаться не будет.

К возможным физическим признакам относятся:

• нарушения менструаций,
• сильные колебания веса,
• необъяснимое бесплодие.

На деньги и безденежье

Череда несчастных нелепостей, преследующих человека в денежном плане, указывает на наведение порчи на бедность. Это может быть и ритуал на полное разорение, магический крадник, ритуал с перетягом денег и удачи, подклады на кладбище – вариантов не один десяток.

В любом случае – колдун работает с деньгами, и для наибольшего эффекта нередко стремится заполучить хотя бы монетку из руки предполагаемой жертвы. Энергетика денег велика, поэтому нив коем случае нельзя подбирать купюры или монеты, лежащие на земле или у порога, и лучше не давать никому в долг после восхода солнца.

Посмотрите видео, в котором рассказывается, как снять порчу на безденежье:

На здоровье

Сила заклинания направляется на один орган или весь организм целиком. Оно может быть единичным, т.е. воздействовать на жертву определенное время (с целью испугать), либо многоразовым – разделенным на несколько этапов, раз за разом вызывающими новые заболевания.

В первую очередь слабнет иммунитет, человека поражают вирусы и бактерии, вызывая воспаления. Еще один из верных способов – лишить человека здравого рассудка путем постепенного разрушения личности и ослабления психического равновесия. Заклинаниями у человека вызывают кошмары во сне, видения наяву, мороки и психоз.

Для определения такого вида порчи используют свечи, которые с молитвой зажигают над головой, а затем перемещают по кругу. Знак порчи – сильный треск и чад, неровное и гаснущее пламя.

7 признаков магического воздействия

Распознать порчу можно по необычным симптомам, которые сразу же появляются у человека. Без всяких видимых причин у него начинаются проблемы со здоровьем:

1. Сонливость или бессонница. Жертва не может выспаться, постоянно ощущает себя разбитой. Значительно снижается активность и работоспособность.
2. Сильные головные боли, похожие на мигреневые, которые не удается снять никакими лекарствами. Они возникают в любое время суток.
3. Отсутствие аппетита и потеря веса. Есть совсем не хочется, любая пища кажется невкусной и отталкивающей. Стремительно снижается вес, человек начинает выглядеть болезненно худым.

Бывают и другие странности: в доме постоянно пропадают нужные вещи или, наоборот, находятся предметы, происхождение которых не удается объяснить. Портятся отношения между домочадцами, возникают склоки и скандалы, болеют домашние животные.

Все эти признаки говорят о том, кто-то навел порчу. Это необходимо срочно исправить.

Как снять порчу самостоятельно с другого человека

Семидневный ритуал очищения предполагает наличие стакана святой воды, иконы Святой Троицы, семь свежих яиц, три освященные в церкви свечи. Если Вы решили узнать, как снять порчу с другого человека самостоятельно, то помните, что этот ритуал очищения нужно проводить в одиночестве каждый день на протяжении недели. На столе ставят икону, зажигают свечи, в левую руку берут фотографию и визуализируют изображенного на ней человека.

В правую руку берут яйцо, катают его по снимку и семь раз читают молитву: «Во имя Отца и сына и святого духа, Аминь. От молитвы Богородицы, от креста Иисуса, от печати Христовой, от помощи святых, от моего слова – отойди нечистый бес, проклятый дух, на болота, на древа сухие, на кочки. Там тебе жить, пребывать да кричать, а не в рабе Божьем (имя) самовольничать. Сам Господь Иисус Христос и Пресвятая Богородица мать, все небесные силы: Михаил Архангел, Авоид Ангел и святые чудотворцы: Иифон и Мароф, Илья Пророк, Дмитрий Ростовский, Георгий Победоносец, Николай Чудотворец, Иоанн Креститель, царь Давид, Василий Истофер, Никита Великомученик и слово мое страшно, а заговор силен! Запрещаю тебе, нечисты дух быть в рабе божьем (имя), пойди вон сейчас, сию же минуту со всеми своими чарами да порчами, прочь ступай, где раньше был. Там живи, а этого раба Божия (имя) оставь навсегда, ныне и во веки веков. Аминь. Аминь. Аминь!»

Как только закончите выкатку, выбрасывайте яйцо в унитаз так, чтобы оно разбилось и несколько раз смывайте воду за ним. Окропите фотографию святой водой и приложите к иконе Святой Троицы. Для закрепления результата рекомендуется обратиться к ясновидящему, который подтвердит, что сглаз и порча больше не мешают жить человеку, изображенному на фотографии.

Опытный экстрасенс также сможет диагностировать и снять порчу по фотографии человека с помощью отливки на воск, анализа картами Таро, определить порчу с помощью рун или ему скажут об этом сущности из Тонкого мира. Работа профессионального ясновидящего гораздо лучше и эффективнее, чем самостоятельная практика.

С мужа

Внимательная женщина всегда заметит, что с ее мужем «что-то не так».

Бывает и раньше его самого. И кто, кроме любящей жены, способен ему помочь?

Чтобы узнать лунные фазы на предстоящую работу — загляните в специальный лунный календарь. Не возбраняется делать это и в полнолуние, а вот растущую луну обязательно следует переждать.

В теплое время года рано утром нужно выйти вместе с супругом на луг. Ступая босиком по свежевыпавшей росе, приговаривать:

«Иду я по росе утренней, собираю травы зеленые, варю зелье от порчи. Не живать в теле порче, не бывать гадости! Слово мое крепко, твердо, сильно! Как могуче стоят травы молодые, так могу и заговор мой будет! Аминь, аминь, аминь!».

Луг следует обойти посолонь три раза, затем собрать с него травы, которые можно добавить в чай (несколько или один вид), дома заварить и поить мужа три дня.

В случае, если мужчина отказывается участвовать в ритуале или попросту не верит в магию, можно взять его фотографию. Представьте, что вашего мужа опутывают темные нити порчи. Вам нужно как бы отсечь их накаленным на огне ножом, приговаривая:

«Нож, благодатным огнем закаленный, будь помощником моим, будь оружием моим. Очисти (имя) от козней колдовских, отсеки путы темные, уничтожь узлы злые, разорви цепи недобрые. Забери беду да несчастье! Аминь».

Признаками, что работа подействовала, будут неприятные ощущения у мужчины: озноб, головные боли. Обряд следует провести не менее трех раз.

Способы и особенности восстановления после избавления от заклинания

Если после снятия сглаза самочувствие стало еще хуже, значит, были нарушены правила энергетического восстановления. Вот о чем следует помнить:

• на протяжении всех дней, когда порча выходит, рекомендуется соблюдать режим дня, организму требуется полноценный отдых и сон;
• нельзя принимать алкогольные напитки и курить;
• при головокружениях и головных болях нужно принимать прохладный душ — вода обладает свойством смывать негативную энергетику;
• можно раздобыть в церкви святую воду и умываться ею по утрам;
• волосы хранят в себе большое количество чужой энергетики, расчесывание частым гребнем помогает облегчить дурное самочувствие.

Важно не забывать о правильном питании. Тело нуждается в сбалансированной пище, которая сможет дать силы

В то же время она должна легко перевариваться. Предпочтение следует отдать термически обработанным овощам, свежим фруктам и молочным продуктам.

Обряд с яйцом

Узнать о наличии сглаза и у взрослого и у ребенка возможно выполнив несложный обряд с яйцом. Вам понадобится одно свежее куриное яйцо и стакан чистой воды. Хотите распознать есть ли черное воздействие? Необходимо прибегнуть к помощи кого-либо из родственников, знакомых. Выполняется обряд днем.

Нужно сесть на стул, помощник ставит на голову «сглаженному» стакан с водой, куда, не меняя положения, разбивает куриное яйцо. Теперь в течение нескольких минут нужно посидеть со стаканом на голове, после чего изучить содержимое стакана.

Ежели и вода и яйцо не изменили своего цвета, прозрачности и формы — сглаз отсутствует. Узнать о черном воздействии возможно по проявившейся мутности воды и яйца, своеобразным яичным нитям в воде, изменившемуся цвету. Эти признаки говорят о наличии сглаза у человека. Данный обряд поможет распознать сглаз, сделанный на ребенка.

После ритуала, ежели негативное воздействие подтвердилось, нужно оставить содержимое стакана на девять дней на балконе, после чего вылить его под дерево.

Есть ли негатив на семье?

Все люди энергетически связаны между собой. В особенности это касается семей, когда, например, плохо ребенку, и матери тоже не здоровится. Чтобы определить, есть ли вашем семействе проклятие, необходимо отправиться в лес и насобирать зверобоя. Вам понадобится столько веток, сколько людей живет в доме.

Данное растение испокон веков считали охранником дома и семейного очага. Необходимо развесить каждую веточку возле кроватей своих близких. Теперь нужно наблюдать чья веточка быстрее всех завянет. Если растение увядало равномерно в течение пары дней, значит нет на семье негатива.

Способы определения порчи или сглаза на человеке

Как узнать, есть ли умышленная порча на мне, легкими способами? Есть несколько действенных и доступных способов:

• Нужен стакан воды и необработанное яйцо (подойдет обычное куриное). Ставится стакан на макушку, в стакан вбивается яйцо. Как распознать порчу? В стакане расплылись разводы, серебристые шарики – вред есть. Желток ложится плавно на дно – не беспокойтесь, порча или сглаз никакого отношения к вам не имеет.
• Как узнать, есть ли порча на семье, используя спички? Процедуру проведите с каждым членом семьи. Возьмите стакан чистой воды. Подержите в руках, сосредоточьтесь на своих мыслях некоторое время. Так вы передаете свою энергетику жидкости. Чтобы повысить ожидаемый эффект, добавьте в воду щепотку соли. Зажгите спичку, ждите, пока она догорит почти до конца, бросьте остаток в воду . Наблюдайте, по тому, что случится с огарком, вы узнаете, как проверить есть ли порча. Огарок тонет в воде – злой умысел есть, а если остается на плаву, то это значит, что беда вас обошла стороной.
• Установите признаки порчи на человеке, при помощи свечи. Свеча реагирует и на ауру помещения, поэтому для такого ритуала требуются не только «испытания» свечкой, но и специальные молитвы и заговоры. Приобретите обыкновенную восковую церковную свечку. Зажгите свечу, и водите вокруг человека. Не стоит переживать, если она горит постоянным сдержанным пламенем. Причины для беспокойства есть, только когда пламя меркнет, коптит черным дымом и слышен треск. В таком случае беда наведена.

Диагностика при помощи золота предусматривает металл высокой пробы для эффективности исследования. Ювелирные украшения с примесями для такого способа не подходят, а лучше всего использовать кольцо из чистого золота. Проведя по чистой коже щеки или руки, на ней в случае наведенной порчи или сглаза останется полоска тёмного цвета.

Можно ли избавиться от колдовства самостоятельно

Ритуалы очистки ауры работают особым образом. Не стоит думать, что к ним привлекаются какие-то сторонние силы. Совсем нет. Энергетика на это нам дана от рождения вместе со свободой выбора. Только личность решает, как поступать: верить в себя или нет. Если вы сомневаетесь, можно очиститься от черной программы самой, то результат получается весьма печальным. Любой обряд питается вашей собственной верой. Без нее никуда не уедете, так и останетесь кормом демонов, заставляющих понижать вибрации божественной, чистой энергетики.

Намного лучше провести эксперимент. Проведите ритуал, не анализируя рецепт на достоверность. Если в голове не будут крутиться мысли о том, получится или нет, то эффект окажется впечатляющим и крайне полезным. Вы не только исправите судьбу, но и поверите в свои волшебные силы. А это значит, что станете использовать их впредь, что совершенно изменит жизнь.

Подведем итоги диагностики

Знайте, когда подозреваете негатив, необходимо быть особенно наблюдательным. Ведь способов наведения порчи множество

Любой нюанс должен привлекать ваше внимание. К примеру, какие-то странные вещи в доме или под порогом

Их нельзя трогать руками. Поднимать подозрительные предметы нужно в перчатках или веником на совок сметать. Потом лучше огню предать. Если желаете знать, как определить порчу самостоятельно, то придется научиться обращать внимание на всяческие мелочи. К примеру, взгляд или шепот за спиной. Таким способом часто негатив в поле человека вносят. Но от всего, конечно, не убережешься. Следовательно, необходимо прислушиваться к себе, ощущениям, настроению, самочувствию. Тело первым обнаруживает потерю энергии. Если в доме есть кошка, то и ее к диагностике привлекайте. Это животное не просто ощущает негатив, но и видит сущности из другого мира. Она начинает беспокоиться, вырывается, не желает идти на руки к тому человеку, у которого есть порча.

Дата: 23 января 2020

Кажетта Ахметжанова: как распознать порчу

Возможно, большинство людей уверены, что порча – это только суеверие. Однако сегодня, когда практически каждый человек может столкнуться с болезнями, в лечении которых медицина бессильна, люди все больше начинают интересоваться таким явлением как негативное колдовское воздействие.
Порча – это отрицательное энергетическое влияние, которое, в отличие от сглаза, не считается непреднамеренным порождением негативных эмоций человека. Это намеренное и заранее запланированное нанесение вреда при помощи магических приемов.
Порчу всегда наносит человек, который осознает свою силу. Колдовское негативное влияние.
Поначалу это выражается в мелких неприятностях – у вас постоянно ломается бытовая техника, вы то и дело забываете или вовсе разбиваете мобильный телефон, нигде не успеваете, не можете «достучаться» ни до друзей, ни до начальства, у вас крадут деньги, обманывают на пустом месте. Одним словом, всё валится из рук. А затем это обретает более серьёзную форму, там уже появляются разные виды воздействия, в зависимости от того, какие сферы вам хотели заблокировать. Меняется и внешность человека. Даже очень красивая женщина, под воздействием порчи превращается в дурнушку. Яркие люди теряют свой блеск. Со временем симптомы порчи переходят в хроническую стадию. Задача порчи — расшатать психоэмоциональное состояние человека, сделать его ненормальным для восприятия обществом, семьей и друзьями, изгоем, загнанным в одиночество, сломать дух.
Вы можете определить наличие порчи таким способом:
Налейте в банку или прозрачный стакан чистой воды и разбейте туда свежее яйцо таким образом, чтобы желток не растекался. Подержите стакан на голове 3 минуты. Руки можно менять, если устают, но осторожно, чтобы не всколыхнуть воду. Через 3 минуты также осторожно снимите стакан с головы и внимательно осмотрите.
Если вода прозрачная и желток не изменился и лежит в белке, а белок лежит кучкой, на Вас порчи нет.
Если желток целый, но из белка поднимаются вверх столбики, как бахрома медузы, может быть один такой столбик или несколько, то на Вас наведена порча. Это не очень серьезная порча, в основном на неудачу в семейной жизни, на одиночество, на слезы. Такая порча часто наводится на 3-7 лет. По истечении этого срока энергия порчи рассасывается в эфире.
Если эти столбики (их еще называют «свечи») больше похожи на паутинки, то это совсем легкая порча. Такая легкая порча может наводиться «любителями», т.е. теми, кто купил книгу о черной магии и практикуется, делая гадости своим друзьям, жизнь которых им кажется лучше, чем их собственная. Такая порча все-таки приносит полосу легкого невезения, непонятные недомогания, ссоры в семье, неприятности на работе.

Брак — обзор | Темы ScienceDirect

Введение

Грибки, вызывающие порчу (дрожжи и плесень), связанные с порчей молочных продуктов, можно найти в среде первичного производства (например, молочные фермы и оборудование), а также в среде пищевой промышленности (например, сырные пещеры, производственное оборудование) . Их введение в молочные продукты может привести к получению желаемых ферментированных конечных продуктов или нежелательных дефектов порчи. Важно отметить, что порча, вызванная дрожжами и плесенью, приводит к значительным потерям и отходам пищевых продуктов со значительными экономическими последствиями.В отчете Питта и Хокинга (2009) установлено, что порча пищевых продуктов грибами составляет 5–10% потерь и пищевых отходов во всем мире (Pitt and Hocking, 2009). Признаки порчи, вызванные плесенью, включают вкус, запах и разложение тела. Разнообразные молочные продукты, включая сыр, йогурт, сметану и другие ферментированные или концентрированные молочные продукты, подвержены грибковой порче. В то время как жидкое молоко чаще портится бактериями, продукты с более высоким содержанием кислоты или более низкой активностью воды часто становятся причиной порчи грибком.Плесневые грибки, связанные с порчей молочных продуктов, часто способны расти при низкой температуре, низкой активности воды ( _w ), низком pH и низком напряжении кислорода. Действительно, некоторые плесневые грибки могут метаболизировать слабокислые противомикробные препараты, которые обычно используются в качестве коммерческих консервантов для пищевых продуктов. Наличие плесени порчи в молочных продуктах, которые формулируются, упаковываются и обрабатываются в условиях, поддерживающих их рост, может привести к ухудшению качества, которое может негативно повлиять на восприятие потребителями, а также иметь важные последствия для бизнеса, экономики и устойчивости. молочная промышленность.Меры по снижению вероятности порчи молочных продуктов плесневыми грибами должны быть сосредоточены на предотвращении загрязнения окружающей среды на всем протяжении производственно-технологического цикла, а также на использовании барьеров в готовом молочном продукте (например, защитных культур или упаковки в модифицированной атмосфере). Часто для обеспечения качества продукции необходимо применение нескольких вмешательств или препятствий.

Фактор Ick: микробная порча

Пищевой продукт можно считать испорченным, если он больше не является съедобным или неприемлемым для потребителей или не соответствует качественным характеристикам, которые его производитель или производитель считает оптимальными.Пища портится в результате как естественных биохимических изменений, так и изменений, вызванных ростом и метаболизмом микроорганизмов. Последний включает расщепление белков, углеводов и жиров микроорганизмами или микробными ферментами. Признаки порчи включают изменения внешнего вида, вкуса, запаха и текстуры. Тип порчи зависит от исходной микрофлоры продукта; физико-химические характеристики продукта; и как он обрабатывается, упаковывается и хранится.

Продукты питания и их спойлеры
Молочные продукты. Гетероферментативные молочнокислые бактерии (LAB) представляют собой группу грамположительных бактерий, включая виды Lactobacillus и Leuconostoc, , которые производят кислоту и газ, а в условиях с низким содержанием кислорода и кислой среде определенные LAB становятся преобладающими микроорганизмами, вызывающими порчу. разнообразных продуктов. LAB — это преобладающие бактерии в сыром молоке. Хотя охлаждение подавляет рост LAB, психротрофные бактерии, такие как Pseudomonas , могут расти и производить прогорклые или гнилостные запахи.Пастеризация убивает LAB и психротрофов, но некоторые споры Bacillus и Clostridium могут пережить пастеризацию и медленно расти при температурах охлаждения.

Колиформные бактерии могут вызывать быструю порчу молока, поскольку они способны ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа и разрушать молочные белки. Колиформные бактерии представляют собой большую проблему в сыре, чем в молоке; они могут расти, если заквасочные культуры (LAB) являются медленными продуцентами кислоты и выделяют газ.Большинство психротрофных организмов в молоке разрушаются при температурах пастеризации, но некоторые из них, такие как Pseudomonas fluorescens и Pseudomonas fragi , могут производить ферменты, устойчивые к нагреванию и способные вызывать порчу.

Твердые и полутвердые сыры имеют низкое содержание влаги и pH, что ограничивает рост некоторых микробов. Некоторые колиформные бактерии, виды Clostridium и виды плесени могут расти в этих условиях и вызывать порчу, чаще всего в виде газа или, в случае плесени, поверхностного роста. Pseudomonas или Enterobacter могут испортить мягкие сыры, а Clostridium sporogenes могут испортить плавленый сыр.

Дрожжи и плесень являются основными микроорганизмами, вызывающими порчу культивированных продуктов, таких как йогурт, сметана и пахта. Pseudomonas видов, дрожжи и плесень могут испортить масло. Высокое содержание жира и низкая активность воды в сливочном масле делают его более восприимчивым к росту поверхностной плесени, чем к бактериальной порче. Pseudomonas и Enterobacter могут вызвать прогоркание сливок.Дрожжи, плесень и бактерии могут испортить творог; такие плесени, как Penicillum и Mucor , также хорошо растут на твороге.

Яйца. Внутренняя часть свежеотнесенных яиц обычно стерильна, но вскоре они могут быть заражены многочисленными видами бактерий, которые могут проникнуть через яичную скорлупу и вызвать порчу яйца. Псевдомонады являются обычными возбудителями порчи, но такие плесени, как Penicillium и Cladosporium , иногда растут в воздушном мешочке и портят яйцо.

Мясо и птица. Грамотрицательные аэробные бактерии, такие как Pseudomonas , Acinetobacter и Moraxella , являются основными бактериями для свежего мяса и птицы и почти исключительными агентами порчи мясного фарша. Виды Bacillus и клостридии, в том числе Clostridium perfringens, , также обычны для свежего мяса. Некоторые плесени могут расти на поверхности мяса и вызывать его порчу. Порча домашней птицы, как правило, такая же, как и у другого свежего мяса, но неприятный запах обычно появляется до появления слизи.

Тип порчи обработанного мяса, такого как хот-доги, колбасы и мясные закуски, в значительной степени зависит от того, как они обрабатываются и упаковываются. Дрожжи и бактерии являются наиболее частыми причинами порчи переработанного мяса, причем порча характеризуется появлением неприятного запаха, зеленого цвета и иногда образования слизи. Участвующими микроорганизмами обычно являются Pseudomonas , Enterobacteriaceae, Brochothrix thermosphacta или LAB. Aspergillus, Fusarium, Mucor, Penicillium, Rhizopus, и Botrytis — это плесневые грибки, портящие вяленое мясо, такое как бекон и ветчина.

Морепродукты . В свежей рыбе бактерии, вызывающие порчу, имеют тенденцию расти на коже, жабрах и кишечнике; Наиболее подвержена порче жаберная область. Лучший способ обнаружить порчу свежей рыбы — это понюхать ее, чтобы обнаружить посторонние запахи. Моллюски являются фильтрующими питателями и могут содержать практически любые микроорганизмы, встречающиеся в воде, в которой они были добыты, но после удаления моллюсков из чистой воды доминируют Pseudomonas, Acinetobacter, и Moraxella .В то время как сенсорные исследования являются основным методом, используемым Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) для определения разложенного состояния морепродуктов, агентство заявляет, что гистамин в рыбе и индол в консервированных, свежих и замороженных продуктах из креветок и консервированных крабовых продуктах — это два важные индикаторы разложения, которые можно использовать для подтверждения сенсорных результатов; путресцин и кадаверин — два дополнительных многообещающих индекса.

Фрукты и овощи. Pseudomonas, Erwinia, Bacillus, и Clostridium могут вызывать порчу овощей, в зависимости от типа обращения и хранения; Erwinia carotovora — наиболее распространенные бактерии, вызывающие порчу.Бактериальная порча (обычно описываемая как черная, серая, розовая, мягкая гниль и гниль на концах стебля) сначала вызывает размягчение тканей, поскольку пектины разлагаются, и весь овощ в конечном итоге может превратиться в слизистую массу. Затем происходит метаболизм крахмала и сахара, с появлением неприятного запаха и привкуса, а также с образованием молочной кислоты и этанола.

Плесневые грибки, принадлежащие к таким родам, как Rhizopus, Alternaria и Botrytis , вызывают гниение овощей. Penicillium, Phytophthora, Alternaria, Botrytis, и Aspergillus участвуют в порче цитрусовых, яблок, груш и других фруктов.Дрожжи и плесень более важны, чем бактерии при порче фруктов, потому что большинство фруктов имеют более низкий уровень pH и активность воды. Поскольку дрожжи растут быстрее, чем плесень, они часто вызывают порчу фруктов, в то время как плесень впоследствии разлагает сложные полисахариды в клеточных стенках и кожуре.

Напитки. Пиво обычно сопротивляется росту бактерий, но бактерии родов Lactobacillus, Pediococcus, Pectinatus, и Megasphaera могут вызывать неприятный привкус, мутность и кислотность.Система Pall Corp. GeneDisc Beer Spoilage Bacteria использует полимеразную цепную реакцию для одновременного обнаружения и идентификации 21 основного микроорганизма, вызывающего порчу пива, за один прогон в течение двух часов, что обеспечивает быстрое корректирующее действие и быстрый анализ первопричин в случае загрязнения во время обработки. Система обнаружения и идентификации дрожжей GeneDisc компании Pall Corp. обеспечивает одновременное обнаружение и идентификацию следующих основных видов порчи дрожжей в пиве: Saccharomyces ( cerevisiae, pastorianus, cerevisiae var. diastaticus ), Brettanomyces / Dekkera ( bruxellensis ), Candida / Pichia , Zygosaccharomyces ( bailii ), Saccharomycodes и Schizosaccharomyces . Система обнаружения дрожжей компании Pall Corp. также применима к вину, которое восприимчиво к росту диких дрожжей и плесени, особенно дрожжей вида Brettanomyces , что приводит к появлению привкуса и неприятного запаха.

Фруктовые соки обычно имеют относительно высокий уровень сахара и низкий pH, что способствует росту дрожжей, плесени и некоторых кислотоустойчивых бактерий, что приводит к появлению плесени на поверхности, помутнению и неприятному привкусу.Недостаток кислорода в бутылках и банках ограничивает или устраняет рост плесени, для которой требуется кислород. Однако дрожжи, вызывающие порчу, такие как Saccharomyces и Zygosaccharomyces , устойчивы к термической обработке и могут расти в консервированных продуктах. Propionibacterium cyclohexanicum растет во многих фруктовых соках. LAB может испортить апельсиновый и томатный соки, а некоторые псевдомонады и энтеробактерии также испортят соки. Alicyclobacillus acidoterrestris — бактерия, вызывающая порчу, вызывающая неприятный привкус пастеризованных соков.Система Pall Corp. GeneDisc TAB Spoilers обеспечивает одновременное обнаружение видов Alicyclobacillus ( acidoterrestris, acidophilus, cycloheptanicus, и herbarius ), которые являются основными потенциальными вредителями фруктовых соков .

Тестирование на микроорганизмы
Другие компании, кроме Pall Corp., также предлагают тесты на микроорганизмы, вызывающие порчу. Компания 3M Food Safety недавно объявила, что ее планшет 3M Petrifilm для подсчета молочнокислых бактерий сертифицирован как метод, проверенный AOAC для использования с различными продуктами питания.Сертификация заключалась в независимой лабораторной валидации метода в соответствии с протоколом, утвержденным Исследовательским институтом AOAC. Готовая к использованию пластина упрощает процесс тестирования лабораторных микроорганизмов, вызывающих порчу, поскольку служит комплексным решением. Это устраняет необходимость в трудоемкой подготовке сред, специальных разбавителей и корректировке pH образца, необходимых при традиционных испытаниях для лабораторных лабораторных исследований, которые вызывают озабоченность в отношении мяса, рыбы, птицы, полуфабрикатов, продуктов, молочных продуктов, приправ и соусов. .

Neogen Corp. предлагает производителям напитков разнообразные среды для обнаружения индикаторных организмов и микроорганизмов, вызывающих порчу, а также наборы для экспресс-микробиологических тестов на дрожжи, плесень, колиформные бактерии и общий подсчет в чашках. Компания Charm Sciences Inc. предлагает систему Charm EPIC, — систему биолюминесценции для микропланшетов, которая измеряет уровень микробного аденозинтрифосфата (АТФ) для прогнозирования порчи продуктов длительного хранения, сверхвысоких температур и напитков на основе молока с увеличенным сроком хранения. Он также предоставляет тесты гигиенических мазков на АТФ, которые измеряют общее количество АТФ из бактерий, дрожжей, плесени, биопленок и остатков пищи на оборудовании, поверхностях и в зонах окружающей среды.

Нанотехнологические разработки
Нанотехнологии продолжают изучаться как средство разработки умных упаковок, указывающих на потенциальную порчу или срок годности содержащихся в них продуктов или помогающих контролировать микробную порчу. Группа европейских ученых под руководством Джонатана Н. Коулмана из Тринити-колледжа в Дублине разработала печатные транзисторы, полностью состоящие из двумерных наноматериалов, которые позволяют потребительским товарам собирать, обрабатывать, отображать и передавать информацию.Коулман сказал, что транзисторы могут раскрыть потенциал для таких приложений, как упаковки для пищевых продуктов, которые отображают цифровой обратный отсчет для предупреждения о порче продукта, этикетки, указывающие, когда вино находится при оптимальной температуре подачи, и даже коробки с молоком, которые отправляют сообщение на мобильный телефон с предупреждением. что молоко вот-вот устареет. Команда использовала стандартные методы печати, чтобы объединить графеновые нанолисты в качестве электродов с двумя другими наноматериалами в качестве канала и разделителя, чтобы сформировать рабочий транзистор.Команда опубликовала свои результаты в апрельском выпуске журнала Science за 2017 год.

Несколько докладчиков на IFT17 рассказали об использовании нанотехнологий для сокращения отходов из-за микробной порчи упакованных пищевых продуктов. Во время симпозиума «Нано-упаковка для повышения безопасности пищевых продуктов и уменьшения количества пищевых отходов» Тони Джин из Службы сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США (USDA) обсудил антимикробную активность наночастиц и наноэмульсий в пищевой упаковке против патогенов пищевого происхождения и микроорганизмов, вызывающих порчу. и Умут Юджел из Университета штата Канзас обсудили использование наноэмульсий для доставки эфирных масел с улучшенным антимикробным действием против порчи и патогенных микроорганизмов.

Исследователи под руководством Сильваны Андрееску из Университета Кларксона разрабатывают бумажные сенсоры, которые меняют цвет, когда продукты и косметика портятся. Датчики связываются с активными формами кислорода, которые продукты накапливаются по мере старения и в конечном итоге портятся. Выступая на национальном собрании Американского химического общества в августе 2017 года, Андрееску сказал, что однажды эта технология может быть включена в интеллектуальные этикетки, которые будут сообщать потребителям, когда следует отказаться от продукта. Каждый датчик включает в себя все необходимые реагенты для обнаружения на листе бумаги и может быть адаптирован к различным целям, включая пищевые загрязнители, антиоксиданты и свободные радикалы, указывающие на порчу.По словам Андрееску, в то время как в большинстве других датчиков используются растворы, которые перемещаются по каналам, в их датчиках используются наноструктуры и стабильные неорганические частицы, которые обладают окислительно-восстановительной активностью и меняют цвет при взаимодействии с целевыми веществами; интенсивность изменения показывает, насколько концентрирован каждый аналит.

Срок годности и маркировка даты
Компании по производству продуктов питания и напитков определяют срок годности своих продуктов путем мониторинга физических, химических и микробных изменений, которые происходят во время хранения в различных условиях, включая температуру, влажность, продолжительность хранения, и упаковка.Они могут измерять рост микроорганизмов или использовать прогнозное моделирование для прогнозирования роста. Прогностическое моделирование включает компьютерное моделирование роста микроорганизмов в пищевых продуктах в зависимости от температуры, pH, уровня кислорода и других факторов для прогнозирования таких параметров, как время задержки и время достижения определенного уровня. Среди различных доступных моделей: Портал прогнозной микробиологической информации Министерства сельского хозяйства США; ComBase , разработанный Службой сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США и Университетом Тасмании; и система Campden BRI Forecast , которая предоставляет модели для рыбы, мяса, свежих продуктов, фруктов, напитков и подкисленных пищевых продуктов.

Пищевые компании используют информацию о сроке годности, чтобы указать на этикетке с датой, когда продукт следует потреблять для обеспечения наилучшего качества. По данным Альянса торговых партнеров (TPA), сотрудничества производителей и розничных продавцов бакалейных товаров под руководством Ассоциации производителей продуктов питания и Института маркетинга пищевых продуктов, на упаковках используется более 10 различных заявлений, в том числе «Продать до», «Использовать, «Срок действия истекает», «Срок годности», «Лучше, если использовался» и «Лучше всего до ». ». Это может привести к тому, что потребители откажутся от безопасного или годного к употреблению продукта, говорится в сообщении TPA, добавив, что около 44% пищевых отходов, отправляемых на свалки, поступают от потребителей, и что устранение путаницы среди потребителей в отношении маркировки даты продукта может сократить общий национальный объем пищевых отходов на 8%. .

В 2017 году TPA объявил об общеотраслевых усилиях по уменьшению заблуждения потребителей относительно этикеток с датами продуктов, рекомендовав производителям и розничным торговцам добровольно принять стандартные формулировки на упаковке о качестве и безопасности продуктов. TPA выпустил технический документ «Маркировка даты кода продукта: важная инициатива по уменьшению путаницы среди потребителей» и «Руководство по внедрению маркировки даты кода продукта», в котором рекомендуется использовать только две стандартные фразы: «НАИЛУЧШЕЕ, если используется» (или «НАИЛУЧШЕЕ, если Используется или замораживается до »), чтобы указать дату, когда продукт может не вкусить или работать, как ожидалось, но все еще безопасен для употребления, и« ИСПОЛЬЗОВАТЬ до »(или« ИСПОЛЬЗОВАТЬ или заморозить до »), чтобы указать дату, к которой продукт следует употреблять или выбрасывать, потому что он очень скоропортящийся и со временем может вызвать проблемы с безопасностью.В руководстве также предлагаются модификации для разных размеров упаковки. Новый добровольный отраслевой стандарт соответствует рекомендации Службы безопасности и контроля пищевых продуктов Министерства сельского хозяйства США «Лучше всего, если используется».

Признавая, что потребительские привычки в домашних условиях, включая хранение, обработку и приготовление пищевых продуктов, важны для поддержания свежести и качества, TPA сослался на приложение FoodKeeper , предназначенное для того, чтобы помочь потребителям научиться хранить продукты и напитки, чтобы максимально увеличить их количество. их свежесть и качество.Приложение, доступное на FoodSafety.gov, было разработано Службой безопасности пищевых продуктов и инспекции Министерства сельского хозяйства США совместно с кафедрой пищевой науки Корнельского университета. Он предоставляет информацию о сроках хранения, обращении, безопасности пищевых продуктов и хранении более 400 охлажденных, замороженных и стабильных при хранении пищевых продуктов.

Нил Х. Мермельштейн , член IFT, заслуженный редактор отдела пищевых технологий

[адрес электронной почты защищен]

Обнаружение порчи пищевых продуктов и патогенных бактерий на основе реакции обнаружения лигирования в сочетании с проточной гибридизацией на мембранах

Традиционные методы культивирования по-прежнему широко применяется для идентификации бактерий в секторе контроля пищевых продуктов, несмотря на то, что на это уходит много времени и труда.Технологии микрочипов представляют собой интересную альтернативу. Однако они требуют более высоких затрат и технических знаний, что делает их по-прежнему непригодными для рутинного микробиологического анализа. В настоящем исследовании описывается разработка эффективного метода идентификации бактерий, основанного на проточной обратной гибридизации дот-блоттинга (FT-RDB) на мембранах в сочетании с реакцией высокоспецифичного обнаружения лигирования (LDR). Во-первых, методология была оптимизирована путем тестирования различных типов ферментов лигазы, мечения и мембран.Кроме того, были разработаны специфические олигонуклеотидные зонды на основе гена 16S рРНК с использованием биоинформатического инструмента Oligonucleotide Retrieving for Molecular Applications (ORMA). Были отобраны и синтезированы четыре зонда, специфичных для Aeromonas spp., Pseudomonas spp., Shewanella spp. И Morganella morganii соответственно. Для валидации зондов 16 эталонных штаммов из коллекций типовых культур были протестированы гибридизацией LDR и FT-RDB с использованием универсальных наборов, нанесенных на мембраны.В заключение, описанная методология может быть применена для быстрой, точной и рентабельной идентификации видов бактерий, что особенно важно для безопасности и качества пищевых продуктов.

1. Введение

Микробиологическая порча пищевых продуктов является областью глобальной озабоченности, вызывая серьезные отравления пищевого происхождения и приводя к большим экономическим потерям для сектора производства пищевых продуктов. Микробиологическая безопасность пищевых продуктов приобретает все большее значение для потребителей, а также для пищевой промышленности, и были приняты правила, требующие мониторинга и обеспечения соблюдения систем контроля.Исследования в области безопасности и качества пищевых продуктов были постоянно сосредоточены на поиске чувствительных, точных, быстрых и экономичных методов определения потенциальных микробных рисков. Обычные методы культивирования и фенотипические тесты все еще широко применяются в области микробиологии пищевых продуктов, но требуют много времени и трудозатрат. За последние годы инструменты молекулярной диагностики значительно улучшились, и для идентификации микробов были внедрены иммуноанализы, масс-спектрометрия и технологии на основе ПЦР.Микроматрицы — это мощные, чувствительные и специфические высокопроизводительные технологии, которые позволяют проводить точную идентификацию на основе обнаружения одной цели и могут определять тонкие различия в геномах бактерий. Массивы генов могут одновременно гибридизировать несколько ДНК-мишеней и, таким образом, обладают огромным потенциалом для обнаружения и идентификации видов бактерий [1]. Благодаря увеличению количества полных последовательностей микробного генома, микроматрицы ДНК становятся обычным инструментом во многих областях микробных исследований [2].Для идентификации бактерий используются так называемые массивы олигонуклеотидов, состоящие из коротких олигонуклеотидных зондов, специфичных для соответствующей целевой последовательности. В последнее десятилетие наборы олигонуклеотидов успешно применялись для обнаружения бактериальных патогенов как в клинической, так и в пищевой промышленности [3–7]. Однако, помимо многочисленных преимуществ, таких как информативность и высокая воспроизводимость, а также возможность миниатюризации и простоты автоматизации, большинство описанных методов микроматрицы требуют повышенных затрат на оборудование и более квалифицированного персонала, что ограничивает их широкое применение для рутинных анализов в обычных пищевых продуктах. контрольные лаборатории.В этом смысле обратная гибридизация дот-блоттинга (RDB) с использованием макромассивов на основе мембран представляет собой экономичную альтернативу, которая требует менее специализированного оборудования и может использоваться в любой хорошо организованной лаборатории молекулярной биологии [8]. Более того, была разработана система гибридизации, в которой с помощью отрицательного давления образцы ДНК активно протекают через мембраны и иммобилизованные зонды. Эта проточная система гибридизации является наиболее эффективным методом молекулярной гибридизации и имеет преимущества, заключающиеся в том, что она очень быстрая, полуавтоматическая, чистая, универсальная и менее дорогая, чем традиционная гибридизация.Кроме того, диффузия и локальная реакционная концентрация ДНК увеличиваются за счет трехмерных объемов, что приводит к более высокой чувствительности [9].

Хотя основным принципом метода гибридизации является различение между идеальным совпадением и одним единственным несоответствием, эту специфичность трудно достичь с помощью классических наборов олигозондов, и перекрестные реакции могут привести к ложноположительным результатам [10]. Это имеет особое значение для сектора контроля пищевых продуктов, поскольку виды бактерий, присутствующие в пищевых продуктах, могут значительно различаться по своей патогенной природе и природе порчи, и необходимо специально выявлять те, которые представляют высокий микробный риск.С помощью реакции обнаружения лигазы (LDR) последовательности можно дифференцировать только по одному полиморфизму, и можно различить близкородственные виды бактерий с высоким сходством последовательностей. Технология микрочипов, основанная на LDR, связанных с универсальным массивом олигонуклеотидов, была описана в другом месте [11] и требует разработки двух олигонуклеотидных зондов, специфичных для каждой целевой последовательности. Различающий зонд имеет метку на конце 5 ‘и различающую основу на конце 3’. Общий зонд содержит уникальную последовательность на 3′-конце, которая адресована определенному месту универсального массива (почтовый индекс).В реакции лигазы оба зонда соединяются только в том случае, если присутствует комплементарный шаблон, и эта матричная последовательность демонстрирует идеальное совпадение в различающей позиции. Описанная методика успешно применяется для обнаружения и идентификации патогенных видов бактерий в молоке [11].

Основываясь на этих предыдущих работах [11], настоящая работа была сосредоточена на разработке специфических LDR-зондов для обнаружения видов бактерий, вызывающих порчу пищевых продуктов. Соответственно, были рассмотрены последовательности гена 16S рРНК наиболее значимых видов пищевых патогенов и бактерий, вызывающих порчу, и были определены однонуклеотидные полиморфизмы для дискриминации на уровне видов с помощью инструмента биоинформатики ORMA [12].

Целью данного исследования была разработка быстрой и рентабельной технологии проточной гибридизации, основанной на подходе с высокой специфичностью LDR в сочетании с универсальными макромассивами на мембранах. Предлагаемая методология сочетает в себе эффективность и специфичность метода микроматрицы с быстротой и удобством проточной гибридизации, что представляет особый интерес для идентификации микробов в области безопасности и качества пищевых продуктов. Применение этого чувствительного метода приведет к быстрому и раннему обнаружению бактерий, вызывающих порчу пищевых продуктов, и, таким образом, будет способствовать точному анализу и контролю микробных рисков.

2. Материалы и методы

2.1. Дизайн специфических олигонуклеотидных зондов

Для дизайна зонда до пятидесяти последовательностей гена 16S рРНК видов бактерий, проявляющих патогенную активность или активность порчи, были загружены из общедоступных баз данных (NCBI, RDP) и согласованы с программой биоинформатики ClustalX 2.1 [13]. Консенсусные последовательности определяли для каждого вида и / или рода с помощью программы GenDoc 2.7 [14], учитывая полиморфизмы с процентом выше 30%.На основе согласованных последовательностей каждого вида и / или рода зонды-кандидаты были разработаны с помощью биоинформатического инструмента Oligonucleotide Retrieving for Molecular Applications (ORMA) [12]. Все потенциальные зонды-кандидаты были протестированы in silico против эталонных баз данных (RDP, NCBI) на предмет их специфичности. В конце были отобраны четыре зонда для проведения исследований в рамках настоящей работы, специфичных для родов Aeromonas , Pseudomonas , Shewanella и видов Morganella morganii , соответственно.Последовательности конкретных пар зондов и соответствующие положения почтовых индексов перечислены в таблице 1. Последовательности ДНК почтовых индексов были выбраны случайным образом, как описано ранее [15].

2.2. Бактериальные штаммы и питательные среды

Для валидации синтезированных зондов были протестированы 16 эталонных штаммов (таблица 2). Контрольные штаммы бактерий были получены из Испанской коллекции типовых культур (CECT). Штаммы реактивировали в бульоне для инфузии мозга и сердца (BHI) (Becton, Dickinson and Company, Le Pont de Claix, Франция) и инкубировали в течение 24 часов при 30 ° C. После этого бактериальные культуры выращивали на агаре для подсчета на чашках (PCA) (Oxoid, Hampshire, England) при 30 ° C и выделяли отдельные колонии.Для выделения ДНК одиночную колонию инкубировали в BHI в течение 24 ч при 30 ° C.

Aeromonas caviae ATCC 15468 Aeromonas caviae veronii ATCC 35624 BM-65 Morganella morganii Morganella morganii Morganella 9022 9022 Morganella morganii 9027 9027 9022 Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 Pseudomonas fragi ATCC 4973 TCC 12633 wan Штамм Aeromonas caviae Bacillus cereus ATCC 14893 a Morganella morganii Pseudomonas fluorescens ATCC 17397 Pseudomonas fragi ATCC 4973 Pseudomonas putida ATCC 17453 Pseudomonas syringae ATCC 19310 wan Sheerd Shewanella putrefaciens ATCC 8071 Staphylococcus aureus ATCC 9144 a отрицательный 9026 отрицательный 2.3. Экстракция ДНК и ПЦР-амплификация Полную геномную ДНК экстрагировали с помощью тканевого мини-набора DNeasy (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США), и ген 16S рРНК амплифицировали, как описано в другом месте [11], с использованием универсальной пары праймеров 20F / 1500R. [16]. Продукты ПЦР очищали с использованием набора для очистки геля Wizard SV и системы очистки PCR (Promega Italia, Милан, Италия) и количественно определяли электрофорезом в агарозном геле с количественной лестницей ДНК LowRanger 100 п.н. (Norgen Biotek Corp., Торольд, Онтарио, Канада). 2.4. Реакция обнаружения лигазы (LDR) Отобранные пробы были заказаны для синтеза (Thermo Fisher Scientific GmbH, Ульм, Германия). Каждая пара зондов состояла из общего зонда с фосфатной модификацией на 5′-конце и уникальной последовательности (комплементарный почтовый индекс) на 3′-конце, а также различающего зонда со специфическим нуклеотидом на 3′-конце и метки для обнаружения на 3′-конце. 5 ′ конец. Были протестированы три разных метки: Cy3, Cy5 и биотин. Лиофилизированные зонды ресуспендировали в воде, получая концентрацию 100 М.После этого была приготовлена ​​смесь зондов, содержащая 1 М каждого олигонуклеотида каждой пары зондов. Пара зондов, комплементарная синтетической матрице ДНК, также добавлялась в качестве контроля лигирования к смеси зондов (см. Таблицу 1). Общий объем LDR составлял 20 л, и он включал 1X лигазный буфер, 4 Ед лигазы, 0,05 М каждого зонда, 0,5 М синтетическую матрицу ДНК и 5–50 фмоль продуктов ПЦР. Были протестированы три фермента лигазы: БОЕ ДНК-лигаза (Stratagene, Ла-Холла, Калифорния, США), амплигаза (Эпицентр, Мэдисон, Висконсин, США) и taq лигаза (New England Biolabs, Беверли, Массачусетс, США). 2,5. Денатурация продуктов LDR Было приготовлено гибридизационных смесей LDR общим объемом 65 л, содержащих 20 л продуктов LDR, 0,1 М, помеченных c , почтовый индекс 66 (дополняющий почтовый индекс 66, см. Таблицу 1), 0,1 мг / мл сперма лосося и раствор A (2X SSC / 0,1% SDS). Перед проведением гибридизации с универсальными матрицами или мембранами эти смеси денатурировали при 95 ° C в течение 2 минут и охлаждали на льду. 2.6. Подготовка мембраны и последующая иммобилизация олигонуклеотидов Аминомодифицированные олигонуклеотиды zipcode (100 M; Thermo Fisher Scientific GmbH) разбавляли 0.5 M буфер бикарбоната натрия (pH 8,4) до различных концентраций (1 M, 0,1 M и 0,01 M) и были отмечены точками в разных объемах (1 л, 0,5 л, 0,3 л, 0,2 л и 0,1 л) в данных положениях. на мембранах. Одна мембрана содержала девять субматриц, что позволяло гибридизовать девять образцов одновременно. Были протестированы два разных типа мембран, для которых потребовались разные процедуры подготовки. Мембраны Nylon Biodyne C (Nylon 66 с отрицательным зарядом; размер пор: 0,45 мкм; Pall Co.) кратковременно промывали 0.1 М HCl, а затем инкубируют в свежеприготовленном 16% EDC (гидрохлорид N- (3-диметиламинопропил) -N-этилкарбодиимида; Sigma-Aldrich) в течение 15 мин. После сушки на воздухе и расстановки олигонуклеотидов все оставшиеся активные группы гасили 0,1 М NaOH в течение 10 мин. Наконец, мембраны трижды промывали деионизированной водой и сушили на воздухе для хранения или сразу использовали для гибридизации. Нитроцеллюлозные мембраны Protran BA 85 (размер пор: 0,45 мкм; Sigma-Aldrich) использовали без какой-либо предварительной обработки.После нанесения точек на олигонуклеотиды мембраны подвергали воздействию УФ-света (254 нм) в течение 30 секунд для сшивания олигонуклеотидов. 2.7. Проточная гибридизация на мембранах Проточная гибридизация была выполнена на устройстве HybriMax (патент № US6020187; Hybribio Limited, Гонконг, Китай) [17], которое работает на основе особого принципа проточной гибридизации, вызванной за счет отрицательного давления под герметичной гибридизационной мембраной, создаваемой накачкой. Шаги были следующими: (1) предварительная гибридизация мембраны с 0.5 мл раствора A, (2) разбавление денатурированных продуктов LDR 450 л раствора A и гибридизация с мембраной при 50 ° C в течение 15 минут, и (3) промывание мембраны дважды 0,5 мл раствора A для устранения негибридизованной ПЦР продукты. При работе с биотин-меченными зондами проявление окраски проводили следующим образом: (4) дважды промывали мембрану 0,5 мл 0,1 М цитрата натрия, (5) инкубировали 0,5 мл стрептавидин-пероксидазы хрена (HRP) при 37 °. C в течение 5 мин, (6) промывка мембраны дважды 0.5 мл раствора А для удаления несвязанной пероксидазы, (7) двукратная промывка мембраны 0,5 мл 0,1 М лимоннокислотного буфера (pH 5) и (8) проявление цвета 0,5 мл 3,3,5,5-тетраметилбензидина (TMB). ) хромоген. Мембраны были визуализированы и проанализированы с помощью системы визуализации ChemiDoc MP (BioRad). 2,8. Валидация зондов путем гибридизации с универсальной матрицей (UA) на предметных стеклах В то же время зонды были проверены путем гибридизации продуктов реакции LDR с универсальным микрочипом на предметных стеклах в соответствии с методологией, описанной в другом месте [11].Одно предметное стекло содержало восемь субматриц, разделенных силиконовыми изоляторами для герметизации (1,0 × 9 мм; Schleicher and Schuell BioScience, Дассель, Германия), что позволяло проводить гибридизацию восьми образцов одновременно. Вкратце, денатурированные продукты LDR наносили на предметное стекло, и гибридизацию проводили в темной камере при 65 ° C в течение 1 часа 30 минут. После гибридизации слайды промывали при 65 ° C в течение 15 мин в растворе A. Наконец, слайды сушили вращением при 80 × g в течение 3 мин. Флуоресцентные сигналы были получены с разрешением 5 м с использованием системы лазерного сканирования ScanArray Lite (Perkin Elmer Life and Analytical Sciences, Бостон, Массачусетс) с зеленым лазером для красителя Cy3 ( λ, ex , 543 нм; λ em , 570 нм).Все изображения анализировали визуально и статистически, определяя средние значения и стандартные отклонения интенсивности флуоресценции. 3. Результаты 3.1. Проверка зонда путем гибридизации с универсальными матрицами на предметных стеклах При разработке зонда мы рассмотрели последовательности ДНК наиболее важных видов бактерий, вызывающих порчу пищевых продуктов, и патогенных видов бактерий, используя ген 16S рРНК в качестве мишени. Консенсусные последовательности определяли для каждого вида и / или рода, представляющих интерес, и определяющие нуклеотиды определяли с помощью компьютерного программного обеспечения ORMA.Список специфических фрагментов длиной 25–60 п.н. был пересмотрен, и потенциальные зонды-кандидаты были протестированы in silico по справочным базам данных (RDP, NCBI) с целью проверки их специфичности. Четыре из разработанных зондов были выбраны для настоящих исследований, поскольку они специфичны для видов бактерий M. morganii и для Aeromonas , Pseudomonas и Shewanella , которые представляют особый интерес при порче морепродуктов. Перед применением синтезированных зондов в подходе проточной гибридизации они были протестированы in vitro путем гибридизации с универсальными матрицами (UA) на предметных стеклах, как описано в другом месте [11].Разработанные зонды были специфичны для соответствующего вида и / или рода и чувствительны к концентрациям от 5 до 50 фмоль образца ДНК. Кроме того, амплифицированные рДНК 16S двух дополнительных контрольных штаммов ( Bacillus cereus ATCC 14893 и Staphylococcus aureus ATCC 9144) были проанализированы как отрицательные контроли, что привело к отсутствию сигнала флуоресценции против любого из тестируемых зондов. 3.2. Оптимизация подхода проточной гибридизации в сочетании с LDR Принцип проточной гибридизации основан на методологии гибридизации обратного дот-блоттинга (RDB), в которой молекулы-мишени протекают через иммобилизованные зонды внутри мембранных волокон.Это сокращает время, необходимое для гибридизации, с часов до минут, а также упрощает этапы промывки, поскольку любая несвязанная молекула легко удаляется, проходя через мембрану. В настоящем исследовании мы впервые применили методологию на основе LDR к стратегии сквозной гибридизации. Во-первых, с целью оптимизации протокола был проведен ряд гибридизаций в различных условиях только с положительными контролями для гибридизации (66) и лигирования (63).Контроль гибридизации представляет собой меченый синтетический олигонуклеотид, который содержит последовательность ДНК, комплементарную почтовому индексу 66, нанесенному на мембрану: положительный сигнал в этом положении указывает на то, что процесс гибридизации прошел успешно. Контроль лигирования включает синтетический олигонуклеотид и пару зондов, которые комплементарны последовательности ДНК синтетической матрицы. Этот зонд также содержит последовательность ДНК, которая комплементарна почтовому индексу 63, нанесенному на мембрану: положительный сигнал в этом положении указывает на то, что реакция лигирования происходит, как ожидалось.Схема пятнистых олигонуклеотидов почтового индекса показана на рисунке 1. В этих предварительных экспериментах были протестированы различные маркирующие агенты (рис. 2 (а) –2 (с)), и различные концентрации олигонуклеотидов почтового индекса были нанесены на пятна. мембраны ((i) — (iii) на рисунке 2) для сравнения интенсивности точек, полученных после гибридизации положительных контролей. Хорошие результаты были получены при обнаружении олигонуклеотидов в концентрациях 1 М и 0,1 М ((i) и (ii) на Фигуре 2), тогда как концентрации 0.01 M дал точки с неприемлемым уровнем интенсивности. Наилучшие результаты были получены с использованием мечения биотином (рис. 2 (а)) с хорошей интенсивностью как для контроля гибридизации, так и для лигирования. В случае Cy3-мечения не было обнаружено положительного сигнала для контролей лигирования ни в одном эксперименте (рис. 2 (b)). Это было связано с высоким фоном флуоресценции по всей мембране, который затруднял видимость пятен. При мечении Cy5 был получен небольшой фон флуоресценции, но хотя точки лигированных контролей можно было четко обнаружить, интенсивность была ниже, чем полученная при мечении биотином (рис. 2 (c)). Кроме того, были протестированы различные объемы отмеченных почтовых индексов. Четко очерченные точки были получены при объемах более 0,1 л, меньшие объемы приводили к ухудшению воспроизводимости из-за трудностей пипетирования. Тем не менее, меньшие объемы и меньшие точки могут быть получены с помощью подходящих пипеток и наконечников, а также может быть разработан макромассив до 50 точек. Нейлоновые мембраны Biodyne C были описаны как наиболее подходящие для целей гибридизации, поскольку олигонуклеотиды ковалентно связываются с мембранами за счет взаимодействия между отрицательно заряженными карбоксильными группами мембраны и положительно заряженными аминогруппами ДНК.Однако, поскольку известно, что нейлоновые мембраны демонстрируют более высокий фон флуоресценции по сравнению с нитроцеллюлозными мембранами, последние также были протестированы. В случае нитроцеллюлозных мембран олигонуклеотиды ДНК наносились непосредственно на мембраны и поперечно сшивались УФ-светом. К сожалению, результаты были менее удовлетворительными, и мембраны из нитроцеллюлозы показали еще более высокий фон флуоресценции (рис. 3). Аналогичным образом, для мечения биотина наблюдали высокий цветной фон. Более высокий фон для всех трех реагентов для мечения объясняется, главным образом, трудностями в процессах промывки, поскольку нитроцеллюлозные мембраны менее проницаемы.Кроме того, пятна, полученные на нитроцеллюлозных мембранах, не были так хорошо определены, как на нейлоновых мембранах. В следующем эксперименте были протестированы три различных фермента лигазы: ДНК-лигаза БОЕ, , ДНК-лигаза taq, и амплигаза. Наилучшие результаты были получены с ДНК-лигазой taq , демонстрируя точки с более высокой интенсивностью для контролей лигирования. На рис. 4 показаны результаты гибридизации мембран Biodyne C и мечения биотином после проведения реакции лигирования с использованием трех различных ферментов.Аналогичные результаты были получены для флуоресцентной метки Cy5. 3.3. Применение разработанных зондов LDR в методологии проточной гибридизации В качестве заключения экспериментов по оптимизации следующее применение разработанных зондов к проточной гибридизации было выполнено с ДНК-лигазой taq в реакции лигирования. и с биотином для гибридизации на мембранах Biodyne C. Олигонуклеотиды почтового индекса были нанесены пятнами в концентрации 0.1 M и объемом 0,2 л. Схема пятнистого макроматрицы показана на рисунке 5. Методология была проверена на штаммах, перечисленных в таблице 2. С подходом проточной гибридизации бактериальная ДНК соответствующего эталона. штаммы были успешно обнаружены при концентрациях 10 фмоль. Кроме того, специфичность разработанных зондов также была подтверждена с помощью этого метода, что привело к положительным сигналам в соответствующих положениях на мембране макроматрицы (рис. 6) и отсутствию сигнала отрицательных контролей ( B.cereus ATCC 14893 и S. aureus ATCC 9144) (данные не показаны). Кроме того, методология также успешно применялась для смесей амплифицированной ДНК из эталонных штаммов, соответствующих различным видам (рисунки 6 (e) и 6 (f)). 4. Обсуждение Методы на основе микрочипов представляют собой современные технологии для высокопроизводительного молекулярного анализа, обеспечивающие высокую чувствительность, точность и специфичность. Микроматрицы ДНК стали обычным инструментом во многих областях микробных исследований, включая обнаружение и идентификацию видов бактерий, благодаря высокому потенциалу распознавания тонких различий в геноме, возможности одновременного анализа нескольких мишеней и способности обнаруживать некультивируемые бактерии.Кроме того, микроматричный эксперимент можно миниатюризировать и автоматизировать [1, 2, 18]. Благодаря расширению возможностей полного секвенирования микробного генома и достижениям в биоинформатике и биомолекулярных технологиях, ДНК-микрочипы являются многообещающими аналитическими инструментами, которые, как ожидается, в ближайшем будущем заменят трудоемкие и трудоемкие традиционные методы идентификации бактерий. Однако воздействие на сектор пищевых микробов было менее интенсивным, и для целей контроля пищевых продуктов по-прежнему широко применяются традиционные методы культивирования из-за высоких затрат и технических знаний, необходимых для анализов на основе микрочипов. Одной из проблем и самых больших затрат в процессе разработки микроматрицы является идентификация, тестирование и проверка дискриминирующих участков генов [8]. Большинство разработанных олигонуклеотидных микрочипов для идентификации бактерий основаны на пробах с геном 16S рРНК в качестве последовательности-мишени. Рибосомные гены представляют собой идеальные молекулярные маркеры для идентификации микробов с помощью массивов олигонуклеотидов, во-первых, потому что они содержат как консервативные, так и вариабельные области, а во-вторых, из-за огромного количества данных о последовательностях, доступных в общедоступных базах данных, которые облегчают разработку конкретных зондов.Микромассивы на основе гена 16S рРНК успешно применяются для обнаружения пищевых патогенов, выделенных из различных образцов пищевых продуктов [3, 4] и прибрежных вод [5]. В другом исследовании бактериальные пищевые патогены, такие как Bacillus spp., Escherichia coli , Salmonella spp., Staphylococcus spp. И Vibrio spp. были обнаружены с помощью массива олигонуклеотидов на основе 16S рРНК [19]. Однако в этом исследовании дискриминация была достигнута на уровне родов, но не на уровне видов. Ограничения гена 16S рРНК в качестве мишени обусловлены высоким сходством последовательностей этих генов у многих видов бактерий. Тем не менее, дискриминация близкородственных видов бактерий часто требуется, как при клинических заболеваниях, так и в секторе безопасности пищевых продуктов, из-за различных патогенных свойств и характера порчи генетически близких видов. В этом смысле межгенная спейсерная область (ISR) 16S-23S рРНК демонстрирует более высокую вариабельность последовательностей, что позволяет создавать специфические зонды для успешной идентификации бактериальных патогенов пищевого происхождения [20–23].В других исследованиях, направленных на обнаружение патогенов пищевого происхождения, разработанные зонды относились к конкретным генам, таким как вирулентность или гены, кодирующие токсины. Этот подход привел к однозначной идентификации ряда важных патогенов пищевого происхождения, таких как Campylobacter jejuni , E. coli , Salmonella typhimurium , Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica [24, 2522] . Однако высокая специфичность этого подхода контрастирует с проблемами, связанными с необходимостью мультиплексных амплификаций перед гибридизацией. Методология, примененная в настоящем исследовании, была основана на другой технологии микрочипов, которая сочетает в себе высокоспецифичную реакцию обнаружения лигазы (LDR) и множественный высокопроизводительный анализ ДНК на платформе микроматрицы. Подход LDR позволяет различать две последовательности ДНК по одному нуклеотидному полиморфизму и требует разработки двух олигонуклеотидных зондов, специфичных для каждой целевой последовательности. В лигазной реакции оба зонда гибридизуются с существующей матрицей и лигируются только в случае точного совпадения в дискриминирующем положении [26].Еще одним преимуществом LDR является то, что лигирование выполняется в жидкой среде, что позволяет значительно улучшить взаимодействие и гибридизацию двух комплементарных цепей ДНК, что приводит к повышенной чувствительности. После этого продукты лигирования, в том числе соединенные и меченые зонды, гибридизируются в определенном месте на универсальном микрочипе. Поскольку лигированные зонды представляют собой короткие олигонуклеотиды, процесс гибридизации значительно упрощается по сравнению с целыми генами. Кроме того, фрагменты последовательностей, которые гибридизуются с массивом, а именно почтовые индексы, расположены на концах зондов, что также способствует контакту с иммобилизованными последовательностями ДНК.Такие почтовые индексы представляют собой синтетические последовательности, которые уникальны и отличаются от любой существующей последовательности, что позволяет избежать перекрестной гибридизации. Количество последовательностей почтовых индексов не ограничено, и в любое время можно разработать дополнительные зонды, назначив их «свободной» или новой последовательности почтовых индексов, которая наносится на универсальный микрочип. Соответственно, платформу микроматрицы можно легко увеличить для других видов или генов и, таким образом, применить к широкому диапазону микробных образцов. Это представляет особый интерес для идентификации бактерий в пищевом секторе из-за того, что универсальный микроматрица может применяться к любым пищевым продуктам, просто адаптируя смесь зондов, используемых для реакции лигирования, путем добавления зондов, соответствующих целевым видам микробов. . Применение LDR, соединенного с универсальным набором (UA-LDR) для идентификации микробов, было описано различными авторами [27–29], особенно для клинической диагностики. Cremonesi et al. [11] успешно применили эту методологию для обнаружения и идентификации видов бактерий, вызывающих мастит у молочных жвачных животных, включая виды, которые представляют большой интерес как ответственные за болезни пищевого происхождения и порчу пищевых продуктов. Настоящее исследование было основано, с одной стороны, на результатах, полученных этими авторами, а с другой — на разработке дополнительных зондов с использованием того же инструмента биоинформатики ORMA.Сложности наблюдались для некоторых родов, особенно внутри семейства Enterobacteriaceae, для которых дифференциация видов была невозможна из-за высокого сходства последовательностей гена 16S рРНК и большого разнообразия близкородственных видов бактерий, потенциально присутствующих в пищевых продуктах. Наконец, были отобраны четыре зонда, которые оказались специфичными для родов Aeromonas , Pseudomonas и Shewanella , а также для видов M.morganii . Зонды были успешно протестированы in vitro с использованием подхода UA-LDR, описанного Cremonesi et al. [11], будучи специфичными и чувствительными к концентрациям 5 фмоль. Это первый раз, когда зонды LDR были разработаны для этих соответствующих видов и родов бактерий пищевого происхождения. Как упоминалось ранее, подход на основе UA может быть легко расширен дополнительными зондами, соответствующими другим видам бактерий с характером порчи пищевых продуктов, что представляет собой эффективную платформу микрочипов с высоким потенциалом для точной идентификации видов бактерий в секторе контроля пищевых продуктов, где в одном пищевом продукте может присутствовать большое разнообразие видов бактерий, и их необходимо обнаруживать при низких концентрациях. Однако, помимо быстрого развития технологий в области микрочипов, переход к потенциальным коммерческим приложениям происходит очень медленно [8]. Основным недостатком технологии микроматриц является необходимость больших начальных вложений в сложные и дорогие инструменты, необходимые для печати на микрочипах и лазерного сканирования. Кроме того, требуется высокий технический опыт, что ограничивает их применение в хорошо обученных и хорошо оборудованных лабораториях [9, 30]. В этом смысле, хотя пропускная способность макромассивов умеренная по сравнению с микрочипами, первые представляют собой экономичную, быструю, точную и эффективную альтернативу, которая не требует специального оборудования и может использоваться в любой хорошо настроенной молекулярной лаборатории, но при этом сохраняют чувствительность и специфичность технологии микрочипов.Такие макромассивы олигонуклеотидов основаны на методе гибридизации с обратным дот-блоттингом (RDB), при котором специфические олигонуклеотидные зонды иммобилизуются на мембранах, а затем меченая ДНК-мишень гибридизируется с мембранами [31, 32]. Применение проточного (FT) устройства для гибридизации представляет собой усовершенствование метода RDB. Подход FT-RDB был описан различными авторами для обнаружения специфических олигонуклеотидов и в результате стал наиболее эффективным методом молекулярной гибридизации, сочетающим в себе два передовых метода: проточную гибридизацию и одновременное множественное обнаружение на мембране макроматрицы.Активный поток направляет образец ДНК к иммобилизованным зондам внутри мембранных волокон, увеличивая диффузию и локальную реакционную концентрацию ДНК и обеспечивая тесный контакт ДНК-зондов с иммобилизованной ДНК внутри пор мембраны. Обычные дот-блот-гибридизации необходимо инкубировать в течение нескольких часов в пластиковых пакетах или стеклянных пробирках и требовать больших объемов, чтобы покрыть всю мембрану, что снижает концентрацию ДНК, доступную для связывания с зондами, а также значительно снижает активные взаимодействия между комплементарными цепями [ 33].Изобретение гибридизации FT-RDB продемонстрировало, что является эффективным подходом к генотипированию, будучи более эффективным, быстрым (<15 мин) и менее дорогим, чем генные чипы, таким образом, имеет высокий потенциал для использования в идентификации микробов. Проточное устройство гибридизации HybriMax, используемое в настоящем исследовании, было запатентовано Тамом [17]. Помимо преимуществ проточной гибридизации, упомянутых выше, с помощью этого устройства процесс гибридизации может быть полуавтоматизирован, что является более чистым и менее дорогим, чем традиционные протоколы гибридизации [17].Совсем недавно процесс гибридизации HybriMax и FT-RDB на нейлоновых мембранах был успешно применен для генотипирования вируса гепатита B [34, 35]. Сообщалось также о применении HybriMax для генотипирования вируса папилломы человека (ВПЧ) [36]. Целью настоящего исследования было использование подхода гибридизации FT-RDB для быстрой и эффективной идентификации пищевых патогенов и бактерий порчи. В другой работе комбинация FT и RDB была применена для обнаружения десяти кишечных патогенов пищевого происхождения ( Salmonella spp., Brucella spp., E. coli O157: H7, Clostridium botulinum , B. cereus , Clostridium perfringens , Vibrio parahaemolyticus , Shigella 9022itica , enter, Vibrio cholerae , L. monocytogenes и S. aureus ) [9]. В таком исследовании бактериальные гены 16S и 23S были одновременно амплифицированы непосредственно из 540 образцов фекалий, и результаты сравнивались с традиционными методами культивирования.В нашем исследовании рассматривались три зонда, разработанные этими авторами. В этом смысле зонд для L. monocytogenes показал перекрестную гибридизацию со штаммами B. cereus и Bacillus thuringiensis , в то время как зонд для S. aureus перекрестно гибридизировался со штаммами L. monocytogenes . Аналогичным образом, зонд для B. cereus не смог различить B. cereus и B. thuringiensis из-за высокого сходства последовательностей генов 16S и 23S рРНК этих двух видов. В другом исследовании гибридизация RDB на нейлоновых мембранах была успешно применена для обнаружения 14 патогенов пищевого происхождения с использованием специфических зондов для гена 23S рРНК в качестве целевых последовательностей для видов E. coli , C. jejuni , Shigella dysenteriae , V. cholerae , V. parahaemolyticus , Proteus vulgaris , B. cereus , L. monocytogenes , C. botulinum и S. aureus [37].Однако эти авторы также сообщили о проблемах неспецифичности во время процесса гибридизации. Хотя ген 23S рРНК демонстрирует большую вариабельность последовательности, чем ген 16S рРНК, дифференцировать близкородственные виды нелегко. Эти авторы описали трудности в разработке специфических зондов для видов C. perfringens и Streptococcus pyogenes на основе гена 23S рРНК. Кроме того, выделенная ДНК видов Salmonella enterica и Y.enterocolitica в своем исследовании провела перекрестные реакции с E. coli [37]. В недавнем исследовании 11 патогенов пищевого происхождения были обнаружены с помощью биотинилированных видоспецифичных праймеров и гибридизации продуктов амплификации со специфическими зондами на тонкопленочном биосенсоре [30]. Анализ оказался чрезвычайно надежным, чувствительным, специфическим и экономичным, позволив получить надежную идентификацию фрагментов ПЦР в течение 30 минут. Однако специфичность сенсора требует амплификации с видоспецифичными праймерами, включая мультиплексную реакцию ПЦР, которая ограничивает пропускную способность и количество видов-мишеней. Анализы, описанные в настоящей работе, были выполнены с учетом принципов гибридизации FT-RDB, описанных Xing et al. [9], но решив вышеупомянутые проблемы, объединив подход с высокоспецифичными датчиками LDR. В результате устройство HybriMax было успешно применено для обнаружения и идентификации бактериальных эталонных штаммов путем гибридизации соединенных зондов с иммобилизованными фрагментами ДНК на мембранах после проведения ПЦР-амплификации и реакции лигирования.Протокол был оптимизирован для повышения чувствительности метода. В экспериментах по гибридизации RDB результаты обычно визуализируются путем мечения биотином и индуцированной ферментом реакции развития окраски. Чтобы избежать нескольких этапов промывки и инкубации, которые требуются для этой процедуры, были также проведены эксперименты с флуоресцентной маркировкой. Однако вместо ожидаемой более высокой чувствительности обнаруженные пятна были менее интенсивными при флуоресцентном мечении, что сделало мечение биотином и последующую реакцию проявления цвета методом выбора для анализа гибридизации FT-RDB. 5. Заключение Методология гибридизации FT-RDB, описанная в этой работе, является быстрой и эффективной и может быть легко реализована в стандартных микробиологических лабораториях благодаря простоте использования и меньшим затратам по сравнению с дорогостоящим оборудованием, материалами и техническими средствами. опыт, необходимый для платформ микрочипов. Анализ может применяться для целей контроля пищевых продуктов, получения быстрой, точной и специфической идентификации видов бактерий, имеющих важное значение для порчи и безопасности любого пищевого продукта.На этапе ПЦР бактериальная ДНК может быть амплифицирована непосредственно из пищевой матрицы без предварительных этапов выделения и очистки. Благодаря комбинации конкретных LDR-зондов и проточной гибридизации результаты были получены за несколько часов. Микробный риск пищевых продуктов может быть эффективно достигнут с помощью подхода FT-RDB, оцениваемого в этой работе, что приводит к лучшему контролю качества пищевых продуктов и предотвращению болезней пищевого происхождения. Конфликт интересов Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в отношении публикации данной статьи. Благодарности Эта работа финансировалась проектом 10PXIB261045PR из Xunta de Galicia и проектами AGL2010-19646 из Министерства науки и технологий Испании. Преддокторское исследовательское пребывание К. Беме в Италии финансировалось исследовательским сообществом FEMS. Идентификация и характеристика микроорганизмов Campden BRI Идентификация и характеристика микроорганизмов является ключевой частью управление безопасностью и качеством пищевых продуктов, отслеживание загрязнителей и устранение проблем, таких как порча.Знание того, как идентифицировать бактерии или другие неизвестные микроорганизмы, с которыми вы столкнулись, может помочь оценить, представляет ли он угрозу безопасности / порчи или, вероятно, будет термостойким, для пример. Однако иногда вам нужно знать больше, в том числе откуда попал загрязнитель. из. Многие организмы обитают в самых разных средах обитания, и поэтому единственный способ узнать происхождение Контаминант должен идентифицировать / характеризовать его к конкретному штамму, а затем сопоставить его с штамм в другом месте окружающей среды или в конкретном пищевом ингредиенте. Campden BRI — мировой лидер в этом виде работ, использующий самые современные молекулярные (основанные на ДНК) биохимические и фенотипические методы — выбираем те, которые лучше всего решают ваши проблемы. Мы также можем предложить дополнительную информацию как часть услуги, такую ​​как сведения о возможных источниках проблемные организмы или информацию об известных вспышках пищевых отравлений. Среди техник, которые мы используем: Это все в нашем микробиале Брошюра об услугах по идентификации и описанию (5MB) Что влечет за собой идентификация и характеризация? Идентификация микроорганизмов — дается наименование организм (на уровне рода или вида), который может помочь определить, является ли он безопасным или проблема порчи или может быть, например, термостойкой. Характеристика микроорганизмов (типирование) — это группы вместе организмов, которые имеют схожие структуры фрагментов ДНК или антигенные профили, чтобы помочь с отслеживание или отслеживание загрязнения. Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт. Настройка вашего браузера для приема файлов cookie Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины: В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie. Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie. Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер. Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере. Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором. Почему этому сайту требуются файлы cookie? Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня. Что сохраняется в файле cookie? Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется. Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать. Определение порчи от Merriam-Webster испортить · возраст | \ ˈSpȯi-lij \ 1 : акт или процесс порчи особенно : Процесс разложения пищевых продуктов Определение, типы и способы расчета порчи Что такое порча? Порча — это порча или потеря материала в процессе производства.Его также можно использовать для классификации сильно поврежденного материала, который используется для обработки продукта. Чаще всего термин «порча» относится к сырью, срок службы которого очень короткий. В бухгалтерском учете Бухгалтерский учет — это термин, который описывает процесс консолидации финансовой информации, чтобы сделать ее ясной и понятной для всех, порча подразделяется на два типа — нормальная порча и аномальная порча . Чтобы узнать, как построить три основных финансовых отчета, ознакомьтесь с нашим курсом «Основы бухгалтерского учета».Заполните и получите сертификат! Нормальная порча и ненормальная порча Нормальная порча — это тип порчи, который происходит в процессе производства, и владельцы бизнеса могут назвать его нормальным и приемлемым. Например, импортер фруктов понимает, что транспортировка фруктов морским или наземным транспортом обязательно приведет к их порче по разным причинам. Одна из причин заключается в том, что некоторые плоды стареют быстрее остальных, из-за чего они быстрее гниют. Некоторые фрукты могут испортиться из-за того, как с ними обращались, когда их перемещали из одной машины в другую.Затем импортер может рассматривать фунт гнилых фруктов как нормальную порчу, когда он поступает в его магазин, и может отнести его к «себестоимости проданных товаров». Стоимость проданных товаров (COGS) Стоимость проданных товаров (COGS) измеряет «прямые затраты». понесенные при производстве любых товаров или услуг. Сюда входят прямые затраты на материалы ». Аномальная порча, с другой стороны, — это порча, выходящая за пределы нормальной точки, при которой уровень неожиданно высок. Это может быть связано с неисправным оборудованием, некачественным качеством материалов и даже с некомпетентностью операторов. В отличие от обычной порчи, аномальная порча учитывается как понесенные расходы или вводится как отдельная стоимость Затраты, подлежащие инвентаризации Издержки, подлежащие инвентаризации, также известные как затраты на продукцию, относятся к прямым затратам, связанным с производством продукции, для получения дохода, который больше не может быть возмещен. Одним из примеров является компания-производитель пончиков, у которых обычная порча составляет 5 000 пончиков или 5% от общего объема производства 100 000 пончиков в день. Если число превышает 5000, то превышение считается ненормальным браком. Как рассчитать нормальную порчу Чтобы рассчитать нормальную порчу, сначала необходимо подсчитать общий объем готовой продукции, а затем определить испорченные продукты. Например, компания по производству обуви производит 10 000 пар в месяц, и 500 из них не могут быть проданы из-за дефектов или проблем с контролем качества. Нормальный брак рассчитывается как общее количество испорченных единиц, деленное на общее количество произведенных единиц и умноженное на 100.В этом случае это будет 500/10 000 x 100 = 5%. Как рассчитать аномальный брак Аномальный брак легко увидеть, особенно если он размещен как отдельная запись. дебетов и кредитов) и помечены как то, что больше не может быть восстановлено. Из приведенного выше примера мы можем сказать, что любая порча, выходящая за рамки нормальной, считается ненормальной порчей. Почему следует уделять внимание браку? Порча, особенно обычная порча, всегда является частью производственного процесса, так как она неизбежна и ожидаема. Однако важно обратить на это внимание и что-то с этим сделать, прежде чем это станет ненормальной порчей. Вот несколько причин, почему: Это может сигнализировать о необходимости оценки производственного процесса. Причиной порчи может быть часть производственного процесса. Например, конвейерная лента на заводе по производству печенья, которая слишком ослаблена и совершает беспорядочные движения, может привести к поломке печенья. Порча может указывать на ошибку, которая постоянно и неосознанно совершается оператором. При оценке от операторов может потребоваться переподготовка или обучение новому процессу. Порча и побочные продукты Основное различие между порчей и побочными продуктами заключается в том, что порча считается ломом или мусором, который больше нельзя использовать ни для каких других целей. С другой стороны, побочные продукты — это продукты, которые все еще могут быть полезны или могут быть проданы как продукт, отличный от того, что было изначально создано. Например, ресторан, где подают куриное барбекю, может рассматривать куриное барбекю как свой основной продукт, в то время как излишки соуса для барбекю, которые он производит, могут продаваться покупателям как совершенно другой продукт. Теперь это можно рассматривать как побочный продукт. Между тем, порчей будут те части курицы, которые больше нельзя использовать, например, ноги и голова. Заключительные мысли Владельцы бизнеса понимают, что нормальная порча во время производства является допустимым явлением.Однако его не следует оставлять незамеченным, поскольку это может указывать на проблему. Лучше всего провести оценку производственного процесса, чтобы исправить шаги, которые необходимо предпринять до того, как порча станет ненормальной. Дополнительные ресурсы CFI предлагает программу финансового моделирования и оценки (FMVA) ™ Стать сертифицированным аналитиком финансового моделирования и оценки (FMVA) ® для тех, кто хочет вывести свою карьеру на новый уровень.Чтобы продолжить обучение и продвигаться по карьерной лестнице, вам будут полезны следующие ресурсы CFI: Стоимость произведенных товаров (COGM) Стоимость произведенных товаров (COGM) Стоимость произведенных товаров (COGM) — это термин, используемый в управленческом учете, который относится к график или отчет, в котором показаны общие фиксированных и переменных затрат Фиксированные и переменные затраты — это то, что может быть классифицировано несколькими способами в зависимости от его характера. Одним из наиболее популярных методов является классификация в соответствии с Inventory WritedownInventory Writed Down Списание инвентарных запасов — это бухгалтерский процесс, используемый для регистрации уменьшения стоимости инвентарных запасов, и он требуется, когда рабочий цикл инвентаря относится к рабочему циклу (OC). дни, необходимые бизнесу, чтобы получить товарные запасы, продать товарно-материальные запасы и получить наличные от продажи . Published by alexxlab View all posts by alexxlab Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт